重組染色質裝配反應中的核心組蛋白與 DNA 比率的滴定
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| 實驗材料 | 見基本方案 |
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| 試劑、試劑盒 | 見基本方案 |
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| 儀器、耗材 | 見基本方案 |
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| 實驗步驟 |
1. 按照基本方案 6 步驟 1～6 操作。
要得到真實濃度的近似值，DNA 的濃度由 A260 值計算得到，組蛋白的濃度通過 BCA 分析系統來確定。
2. 按如下所述進行 5 個裝配反應：
2.1 在 56.6 ul NH 中（見基本方案 6 步驟 3）加入 1 ul ACF（2～10 U）。
2.2 從冰上取下管子，平衡到室溫。
2.3 加入 10.5 ul AM 主混合液（見基本方案步驟 4），及 2.5、2.22、2.0、1.82、 1.67 ul DNA 模板（使用過量的拓撲異構酶Ⅰ變松弛或超螺旋的；見基本方案步驟 5）。馬上輕輕地渦旋混勻 2～3 S。
2.4 27℃ 裝配 1.5～2.5 h。
3. 按照基本方案步驟 8～12 操作。
4. 從凝膠上分析確定組蛋白與 DNA 最高量的比值，這時仍然能觀察到未彌散的梯度。使用下一個最低的比值作為進行進一步裝配反應的最理想的比值。重新計算核心組蛋白的有效濃度以使新的最佳比值為 1.0：1。 展開 |
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