(1)最好使用幼嫩的材料,材料含水量大時,可用70%乙醇擦拭,蒸餾水稍沖洗后用濾紙吸干,于液氮中研磨。如果材料量大(20g以上),或所用的植物材料較老,或材料含有較多的酚類物質,應提高β-巰基乙醇的用量。
(2)氯仿抽提時,要保證抽提液中有一定的鹽濃度,否則 DNA 進入沉淀。
(3)CTAB 溶液在15℃以下會沉淀,因此離心和其他操作時不可在低溫下進行。
(4)加入沉淀緩沖液應在高于15℃的室溫下沉淀,如果室溫適宜,沉淀時間足夠而無沉淀出現,可能是鹽濃度高,這時可再加入沉淀緩沖液降低鹽濃度。離心收集 CTAB 沉淀緩沖液沉淀的 DNA 時,不能離心過度,高速度及長時間的離心都會使沉淀過緊,而再溶解困難。
(5)采用真空抽干沉淀時,不能抽得太干抽得太干會使 DNA 斷裂,也可不采用真空抽干,將離心管置通風柜或超凈工作臺中令乙醇自然蒸干,這樣對 DNA 造成的損傷小。
(6)10%的 CTAB 溶液很粘滯,取液時可將其加熱至56℃。
(7)轉移 DNA 溶液用的槍頭要剪去尖,避免對 DNA 的機械損傷。
(8)所得 DNA 應為白色或灰白色,若呈褐色則有多酚物質污染。對于含多酚類物質多的材料,提取緩沖液中可加入1%的 PVP。對于多糖含量高的材料,提取液中 CTAB 的濃度可增至3%或更高。