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  • 發布時間:2020-05-27 10:39 原文鏈接: 使用CytoFLEX流式細胞儀檢測囊泡/外泌體

    囊泡/外泌體天然存在于體液中,并穩定攜帶了一些重要的信號分子。囊泡/外泌體相關功能的研究已經成為研究熱點,并有望在多種疾病的早期診斷中發揮作用。

    通常,因流式細胞儀無法檢測低于 250nm 的顆粒,因而并不是檢測囊泡/外泌體微顆粒的最佳選擇。而貝克曼庫爾特公司的 CytoFLEX 流式細胞儀的問世,為流式檢測囊泡/外泌體微顆粒開辟了蹊徑。

    CytoFLEX是第一臺可檢測100 nm微顆粒的流式細胞儀,并具有可同時檢測13色熒光、單個樣本存儲量大等優秀性能,為微顆粒的檢測提供了理想的檢測平臺。

    材料與方法

    1.試劑

    2.樣本制備


    數據分析

    1. 建立FSC / VSSC散點圖,檢測Megamix-Plus FSC beads(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm),調整gain值。圈定100 nm - 900nm微顆粒分布區域,設定門MP Gate。同樣電壓條件下,樣本檢測管分布于MP Gate門內的即為囊泡/外泌體微顆粒;

    2.建立AnnexinV-FITC/APC雙參數散點圖,通過AnnexinV表達量的多少,區分不同類型的微顆粒。并建立CD63-PE/CD41-PC7雙參數的散點圖,來檢測不同類型的囊泡/外泌體微顆粒,細胞表面抗原的不同。

    *實驗數據由Kaluza軟件分析

    結果

    1. Megamix-Plus FSC beads 檢測結果

    根據微球(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm)的分布,界定微顆粒的位置,將門命名為”MP Gate”。

    2. 囊泡/外泌體微顆粒檢測結果

    圖A中MP Gate顯示囊泡/外泌體微顆粒;圖B和C為相應熒光通道中,微顆粒的自發熒光;圖D中顯示兩群Annexin-V陽性細胞群標記囊泡/外泌體微顆粒。Annexin-V dim在圖中用綠色顯示,該群微顆粒表達CD41不表達或低表達CD63,且細胞較小;Annexin-V high在圖中用紅色顯示,該群微顆粒表達CD41+CD63+,且細胞相對較大。


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