精度
通過提取低 、中和高濃度的QC樣品并重復分析5次以測定批內精度。根據這三個濃度水平計算25OHD的變異系數(CV) 。對低 、中和高濃度的QC樣品進行連續5天的分析，測定批間精度。結果如表2所示。
靈敏度
提取所得的最低濃度內部血清校準品的色譜圖如圖5所示。各色譜圖標記了化合物名稱、峰間信噪比(SNR)和濃度。所有響應均高于檢測限(SNR 5:1)，因此，本方法可檢出維生素D嚴重缺乏癥患者的維生素D水平(<6ng/mL)。
圖5 .色譜圖顯示了最低濃度校準品和各個分析物的信噪比測定結果。
離子抑制
離子抑制研究表明25OHD3在離子抑制區域部分洗脫，如圖6所示。
圖6 .25OHD離子抑制分析，通過放大視圖顯示了25OHD2和25OHD3的洗脫分析結果。
需使用一種穩定同位素標記內標物來補償所觀測到的各個分析物之間的基質效應差異5 。
討論
本文中開發了一種利用UPLC/MS/MS分析血清中25OHD2和25OHD3的方法。該方法通過從血清中進行液-液萃取以及利用定性和定量離子進行各個分析物定量檢測。此外，通過監測定性離子比率提高了準確識別分析物的可靠性。測定結果表明，本方法具有良好的靈敏度以及批內和批間精密度。采用本方法，可以每天分析多達100個樣品。
結論
本文中開發的分析血清中25OHD2和25OHD3的方法具有良好的線性、靈敏度和精度。本方法與傳統的免疫測定法相比，可提供更加可靠的結果。
UPLC/MS/MS能夠準確可靠地測定血清中的250HD2和250HD3，防止誤報接受D2補充治療的患者體內的維生素D總體濃度。
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