便攜式寨卡病毒快速檢測技術

　　一組研究人員研發出了一種便攜式寨卡病毒感染診斷方法，可以在沒有昂貴實驗室資源的地區進行寨卡病毒檢測。這種技術主要是通過自化學加熱的檢測杯中擴增病毒 RNA，然后利用變色染料，檢測出唾液樣品中的病毒，敏感度高達5 plaque forming unit（PFU，空斑形成單位），時間僅需40分鐘。

　　這一研究成果由賓夕法尼亞大學的研究人員發表在6月29日Analytical Chemistry.雜志上。

（出現陽性，就會變成紫色。圖片來自研究論文）

　　“醫療點寨卡病毒分子檢測工具越多越好，”多倫多大學Keith Pardee表示。其研究組今年也開發出了一種低成本的基于CRISPR/Cas9的紙片診斷系統，能快速檢測寨卡病毒，他們設計了一種簡單的模塊化工作流程，由三個步驟組成：擴增、寨卡病毒檢測和CRISPR-Cas9輔助的毒株鑒別。

　　一旦樣品中的RNA通過使用酶和引物的混合物進行擴增后，將一滴擴增產物溶液加入到凍干的含有細胞組分和生物蛋白的紙片上。含有擴增RNA的這滴溶液激活凍干的組分以至于紙片改變顏色，從而指示寨卡病毒陽性結果。

　　寨卡病毒病(Zika virus disease)目前在全球多地流行, 可致小頭畸形、格林-巴利綜合征等神經系統疾病。這種病毒類似于登革熱, 是經伊蚊傳播、由寨卡病毒(Zika virus)引起的一種自限性急性疾病。2016年2月1日, 世界衛生組織(WHO)宣布巴西聚集性小頭畸形和其他神經系統疾病為“國際關注的突發公共衛生事件”, 015年1月1日-2016年2月25日, 全球40個國家和地區報告寨卡病毒經蚊媒的本地傳播, 主要集中在拉丁美洲和太平洋島國, 東南亞國家尚未報告持續性傳播； 傳播范圍有擴大趨勢。

　　由于寨卡病毒免疫分析特異性不強，因此寨卡病毒目前的檢測方法主要是RT-PCR，但這種方法需要昂貴的實驗室設備。

　　賓州大學的Changchun Liu等人研發出了一種新型寨卡病毒檢測技術，這種方法以一種RNA擴增方法：反轉錄-環介導恒溫擴增（reverse transcription-loop mediated, isothermal amplification，RT-LAMP）為基礎，環介導恒溫擴增技術LAMP是2000年發展起來的一種新式恒溫核酸擴增方法，原理是利用四條特異性引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶，在63℃左右對核酸進行擴增。RT-LAMP則是在這一基礎發展出來的靈敏快速，操作簡單的RNA病毒檢測方法。

　　為了避免用電，這一研究組還特別設計了一種通過加水就可以啟動化學反應的實驗杯（見上圖），最后通過變色燃料來確定病毒是否存在。

　　研究組對加入寨卡病毒的健康人體唾液樣品進行了檢測，同時也檢測了血液，尿液和精液，結果發現都具有相似的靈敏度。他們預計這種檢測材料大約每次實驗需要2美元。

　　“我們的這項研究是概念驗證實驗，因此在真正用于臨床醫療之前，還需要進行病患樣品檢測，確保我們的檢測與系統能符合RT-PCR這一目前金標準的要求，保證重復性和可靠性。”