在下最近作人外周血流式，作表面及其胞內染色，試劑說明書說要先分離外周血單個核細胞再染色，我有時候分的紅細胞比較多，其他的方法試過了，都改進的不好，我擔心紅細胞會有影響，想在分離出PBMC以后如果紅細胞比較多的話，就用紅細胞裂解液裂解一下，但是我有如下問題，希望這樣做過的同志指點一下，感激不禁。
（1）有人這樣在分離PBMC以后再裂解的嗎（我知道一般是在全血染色后再裂解紅細胞）？
（2）這樣會影響流式檢測嗎？
（3）用的裂解液配方是什么（最好是自己用過的）。
（4）用法是什么｛我是在如果PBMC分出來以后要是紅細胞比較多的時候使用，這樣要怎樣把分出的PBMC稀釋，加多少裂解液 裂解多長時間，裂解后洗滌幾次等等｝。
我曾做骨髓液分離單個核細胞而后做流式，一般來說用Ficoll分過之后即便還有紅細胞殘留，上流式也可通過“設門”根據細胞形態大小將紅細胞剔除。若紅細胞殘留太多，則可通過紅細胞裂解液進一步去除之。我用的裂解液配方是：
碳酸氫鉀（KHCO3） 1.0g
氯化氨（NH4CL） 8.3g
EDTA-Na2 0.037g 加雙H2O至1000ml，為工作液。
配好后4度冰箱保存，使用時效果更好。我是在Ficoll分過之后用的，所以一般根據離心后EP管里細胞團的大小加紅細胞裂解液，通常5ml骨髓液分離單個核細胞后得到的細胞再加500ul裂解液，震蕩混勻置2－5分鐘紅細胞就基本上裂解干凈了。洗滌次數看白細胞多少而定，因為洗的次數越多，損失就越多。我一般洗一到兩次就OK了。做了很久沒發現這樣處理影響結果。有一點，我是在這樣處理后才標記抗體的，樓上的說是標記過才溶紅細胞，所以建議在溶的時候時間不宜過長，洗滌次數也不宜過多，以免將標記上的單抗洗脫。