四、切片的附貼必須牢固，必須使用合適的粘貼劑。
免疫組織化學染色前的前期準備工作，就是必須對新的載玻片進行處理，新的載玻片表面看起來很干凈，有人認為不需要進行任何的處理，都能夠適合使用，這是一種錯誤的想法。新出廠的載玻片，表面復蓋著開一層油脂樣的物質，如果不加以處理，對切片的附貼是極為不利的。我們的做法是：新的載玻片，放于玻璃清洗液中浸泡4小時甚至過夜，然后取出，經自來水徹底沖洗后，浸入酒精中達2小時以上，取出擦干備用或烘干也可。然后再將載玻片浸入了－氨基－三乙氧基－硅烷（3－Aminopropyl
triethoxy-silane）的稀釋液（1：50用丙酮或無水乙醇稀釋都可以）中硅化10分鐘，后經無水乙醇洗2次，烘干即可使用。
五、切片必須烘烤附貼牢固，既要經得起抗原修復時高溫的作用而不使輕易脫片，又不至于破壞抗原。
應用于免疫組化染色的切片。由于整個過程需經幾個階段的處理，如抗原修復時抗原修復液的沸騰且需持續十幾分鐘，PBS的反復沖洗，有的甚至于4℃冰箱中孵育達十幾小時。因此，對切片的質量要求很高，尤其是切片的附貼程度。以往有人主張切片在60℃以下烘烤30-60分鐘即可按此進行結果是切片掉片嚴重，切片松動率占100%。切片究竟烘烤多長時間才合適，既不脫片和適合各項要求，又不至于破壞抗原。幾組實驗［］診斷P173認為，切片在60℃的恒溫干燥箱中烘烤2-5小時最為合適。這是因為：抗原可耐受如此的溫度，病理科一般使用的石蠟，其熔點在60℃左右，組織浸蠟時，浸蠟箱中的溫度，一般都調在65℃左右，組織在這樣溫度中要浸泡2小時以上，才能達到徹底地浸蠟。組織中的抗原已經受了65℃的溫度考驗，保存下來的抗原，都已具有耐熱性。另外，經上述時間烘烤出來的切片，附貼牢固，抗原保存好，染色成功率達100%，保證了病理診斷的及時性和準確性。
特需要注意的是，不管是應用于診斷的切片還是研究用的切片，烘烤后應盡快進行染色。如果切片切完后，遲遲不進行染色，存放于室溫中或工作冰箱中，切片中的抗原將會隨著時間的延長而逐漸消失，甚至出現假陰性。原則上是新鮮切片，即行染色，染多少張切多少張，這樣才能盡可能的保存表達更多的抗原。
六、切片脫蠟必須干凈，否則將會影響免疫組化染色的最后結果。
蠟不溶于水，不與其它的臨床使用的抗體相融合。它只能靠特用的試劑，處理足夠的時間，才能將其除去。如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上，將會引起許多弊病，如染色不均勻，陽性物時隱時現，真假難辨，背景染色增加等。為了解決上述的問題，切片在染色前必須徹底脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強，脫蠟時間較短。較受使用者的青睞。脫蠟的時間要根據季節，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮，則脫蠟時間不需很多，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時間需要延長，10-20分鐘或更長。總之，操作時應根據不同的季節，不同的室溫，不同的試劑來決定，脫蠟的時間，原則上是要徹底，干凈，完全地脫去切片上的蠟。為了做到這一步，切片在脫蠟前的加溫將有助于完成上述的要求。比如：當天切的切片，燒烤2小時后進行染色，切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程，如果預先切好烤好的切片，在染色前，還必須對切片進行加溫10-20分鐘，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快，效果魁偉更好。