做western上樣前樣品要混勻嗎

Western Blot Quick Guide（以及一天跑完Western的時間規劃）
前期準備：蛋白已經定量，各樣本已經稀釋到某固定濃度，已經和SDS loading buffer混合，已經分裝好，保存與-20°。頭天下午或晚上配膠，分離膠和濃縮膠一起配好，帶上梳子，放入潮濕的自封袋內放入4°冰箱備用。
8:00 從冰箱里取出蛋白樣品，用PCR儀95度加熱5min。混合均勻并離心。
8:30 取出昨晚配好的膠，組合，加電泳液。在電泳液里拔梳子能稍微容易一些。用10ul的槍加樣。
9:00 開始電泳。恒流30mA一般1個小時足夠了。
9:30 開始準備轉膜用的濾紙和PVDF膜，PVDF膜泡甲醇。一般8cm的寬是固定的，所以如果要裁膠的話可以先大概估計一下。
10:10 電泳結束（假設電泳用了70分鐘），起開玻璃板，裁出膠上所要的條帶，如果整塊膠轉就更方便了。把膠放在盛有轉膜緩沖液的培養皿里。
11:00 轉膜開始（這里裁紙和鋪三明治還是比較費時間的，我一般要用30分鐘到50min，所以這里要抓緊時間）。
12:00 轉膜結束（這里按60min的半干轉的時間來計算）。開始封閉1h。
13:00 封閉結束，開始孵育一抗（在這里你可以選擇一抗孵育過夜，如果不過夜的那一天就能結束），如果不過夜的話我一般選擇37° 1h然后在室溫（23°左右）再1h。
15:00 一抗孵育結束。TBST洗滌3*10min或者5*6min。
15:30 開始孵育二抗。室溫1h足夠了。
16:30 二抗孵育結束。TBST洗滌3*10min或者5*6min，這里推薦采用5*6min。
17:00 ECL發光，壓片10min，顯影1min，定影10min，那么在18:00之前你就能看到結果了，呵呵，如果結果不好還有后招，用stripping（一抗二抗洗脫液）洗滌，我用的是碧云天的堿性一抗二抗洗脫液，按照說明書來一般20min就行，然后洗滌幾次，重新封閉1h，然后一抗過夜，明日在繼續戰斗。這樣的話18:30之前也能結束戰斗了。