光合速率測定最經典的方法之一——改良半葉法

　　測定光合速率的方法有多種，特點是科技的進步，測定的方法又增加了，如傳感器測定光合速率。但經典的測定方法可能就是半葉法和黑白瓶法。測定光合速率的方法匯總和黑白瓶法以前已經推送過，今天推送的是半葉法，半葉法也是大學教材中的經典實驗。

　　問題：半葉法的實驗原理和實驗步驟是怎么樣的？注意哪些事項？

　　實驗原理和材料

　　1.實驗原理：

　　改良半葉法系將植物對稱葉片的一部分遮光或取下置于暗處，另一部分則留在光下進行光合作用，過一定時間后，在這兩部分葉片的對應部位取同等面積，分別烘干稱重。

　　因為對稱葉片的兩對應部位的等面積的干重，開始時被視為相等，照光后葉片重量超過暗中的葉重，超過部分即為光合作用產物的產量，并通過一定的計算可得到光合作用強度。乘以系數后還可計算出CO2的同化量。

　　2．實驗儀器：

　　分析天平，烘箱，剪刀，稱量皿，刀片，金屬模板，紗布，錫紙

　　3．實驗試劑：

　　三氯乙酸

　　4．實驗材料：

　　田間有代表性的植物葉片

　　實驗步驟

　　1．選擇測定樣品

　　在田間選定有代表性植株葉片（如葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件等）20張，用小紙牌編號。

　　2．葉子基部處理

　　為了不使選定葉片中光合作用產物往外運，而影響測定結果的準確性，可采用下列方法進行處理：

　　（1）可將葉子輸導系統的韌皮部破壞。如棉花等雙子葉植物的葉片，可用刀片將葉柄的外皮環割約0.5cm寬。

　　（2）如小麥、水稻等單子葉植物，由于韌皮部和木質部難以分開處理，可用剛在開水中浸過的紗布或棉花做成的夾子，將葉子基部燙傷一小段即可（一般用90℃以上的開水燙20s）。

　　（3）由于棉花葉柄木質化程度低，葉柄易被折斷。用開水燙，又難以掌握燙傷的程度，往往不是燙得不夠便是燙得過重而葉片下垂，改變了葉片的角度。

　　因此可改用化學方法來環割，選用適當濃度的三氯乙酸，點涂葉柄以阻止光合產物的輸出。

　　三氯乙酸是一種強烈的蛋白質沉淀劑，滲入葉柄后可將篩管生活細胞殺死，而起到阻止有機養料運輸的作用。

　　三氯乙酸的濃度，視葉柄的幼嫩程度而異。以能明顯灼傷葉柄，而又不影響水分供應，不改變葉片角度為宜。一般使用5%三氯乙酸。

　　為了使燙后或環割等處理后的葉片不致下垂，影響葉片的自然生長角度，可用錫紙或塑料管包圍之。使葉片保持原來著生角度。

　　3．剪取樣品

　　葉基部處理完畢后，即可剪取樣品，記錄時間，開始光合作用測定。一般按編號次序分別剪下對稱葉片的一半（主脈不剪下），按編號順序夾于濕潤的紗布中，貯于暗處。

　　過4-5h后，再依次剪下另外半葉，同樣按編號夾于濕潤紗布中，兩次剪葉的速度應盡量保持一致，使各葉片經歷相等的照光時數。

　　4．稱重比較

　　將各同號葉片之兩半對應部位疊在一起，在無粗葉脈處放上已知面積（如棉花可用1.5×2cm）的金屬模板，用刀片沿邊切下兩個葉塊，分別置于照光及暗中的兩個稱量皿中，80-90℃下烘至恒重（約5h），在分析天平上稱重比較。