光學顯微鏡觀察鏡檢幾種方式介紹

　在光學顯微鏡的發展過程中,相差鏡檢術的發明成功,是近代顯微鏡技術中的重要成就.我們知道,人眼只能區分光波的波長（顏色）和振幅（亮度）,對于無色通明的生物標本,當光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本.

　　相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現象,將人眼不可分辨的相位差變為可分辨的振幅差,即使是無色透明的物質也可成為清晰可見.這大大便利了活體細胞的觀察,因此相差鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡.

　　相差顯微鏡的基本原理是,把透過標本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結構間的對比度,使各種結構變得清晰可見.光線透過標本后發生折射,偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4λ（波長）,如果再增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光合軸后干涉加強,振幅增大或減下,提高反差.在構造上,相差顯微鏡有不同于普通光學顯微鏡兩個特殊之處:

　　1.環形光闌（annulardiaphragm）位于光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標本上.

　　2.相位板（annularphaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ.

二．暗視野觀察（Darkfield）

　　暗視野實際是暗場照明發.它的特點和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線.因此,視場成為黑暗的背景,而被檢物體則呈現明亮的象.

　　暗視野的原理是根據光學上的丁道爾現象,微塵在強光直射通過的情況下,人眼不能觀察,這是因為強光繞射造成的.若把光線斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見.

　　m..m暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡.它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體,而是將光線改變途徑,使其斜射向被檢物體,使照明光線不直接進入物鏡,利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象.暗視野觀察的分辨率遠高于明視野觀察,zui高達0.02—0.004。

三．明視野觀察（Brightfield）

　　明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應用于病理、檢驗,用于觀察被染色的切片,所有顯微鏡均能完成此功能.

　　四.偏光顯微鏡（Polarizingmicroscope）

　　偏光顯微鏡的特點

　　偏光顯微鏡是鑒定物質細微結構光學性質的一種顯微鏡.凡具有雙折射的物質,在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當然這些物質也可用染色發來進行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡.

　　偏光顯微鏡的特點,就是將普通改變為偏光進行鏡檢的方法,以鑒別某一物質是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）.

　　雙折射性是晶體的基本特性.因此,偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物,化學等領域.在生物學和植物學也有應用.

　　五．微分干涉稱鏡檢術（DifferentialinterferencecontrastDIC）

　　微分干涉鏡檢術出現于60年代,它不僅能觀察無色透明的物體,而且圖象呈現出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術所不能達到的某些優點,觀察效果更為逼真.

　　原理;

　　微分干涉稱鏡檢術是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束.分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強度相等,光束分別在距離很近的兩點上通過被檢物體,在相位上略有差別.由于兩光束的裂距極小,而不出現重影現象,使圖象呈現出立體的三維感覺.

　　DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡,技術設計要復雜得多.DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器（polarizer）、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器（analyzer）.偏振器直接裝在聚光系統的前面,使光線發生線性偏振.在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（x和y）,二者成一小夾角.聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向.zui初兩束光相位一致,在穿過標本相鄰的區域后,由于標本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發生了光程差.在物鏡的后焦面處安裝了第二個偌瑪斯斯棱鏡,即DIC滑行器,它把兩束光波合并成一束.

　　六:熒光顯微鏡（FluorescenceMicroscopy）

　　熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發后而產生長波長的熒光,然后觀察.

　　優點:

　　．檢出能力高（放大作用）

　　．對細胞的刺激小（可以活體染色）

　　．能進行多重染色

　　用途:

　　．物體構造的觀察——熒光素

　　．熒光的有無、色調比較進行物質判別——抗體熒光等

　　．發熒光量的測定對物質定性、定量分析

　　七.浮雕相襯顯微鏡（RC）

　　1975年,RobertHoffman博士發明

　　2002年,到期,各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術產品

　　原理：斜射光照射到標本產生折射、衍射,光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影,從而使透明標本表面產生明暗差異,增加觀察對比度。

　　特點：

　　1.提高未染色標本的可見性和對比度;

　　2.圖象顯示陰影或近似三維結構而不會產生光暈;

　　3.可檢測雙折射物質（巖石切片、水晶、骨頭）;

　　4.可檢測玻璃,塑料等培養皿中的細胞,器官和組織;

　　5.聚光鏡的工作距離可以設計的更長;

　　6.RC物鏡也可用于明場,暗場和熒光觀