伏馬毒素的介紹
該毒素是1989年發現的一種新型毒素,由串珠鐮刀菌等產生的真菌毒素。目前已知有7種衍生物,研究證實伏馬毒素可導致馬產生白腦軟化癥(ELEM),神經性中毒而呈現意識障礙、失明和運動失調,甚至造成死亡;對豬產生肺水腫綜合癥(PPE),并被懷疑可誘發人類的食道癌等疾病,從而對畜牧業及人類的健康構成威脅。對我國海門地區進行的3年的跟蹤研究結果表明:伏馬毒素還可使人導致肝癌。
據資料,伏馬毒素大多存在于玉米及玉米制品中,其含量一般超過1mg/kg,研究證實,在大米、面條、調味品、高粱、啤酒中也有較低濃度的伏馬毒素存在。伏馬毒素檢測方法主要有免疫親和柱熒光法、免疫親和柱-HPLC 法、毛細管電泳法、液相/質譜法。
免疫親和柱熒光計測定過程
①標定值的設置
使用FumoniTest標定標準物。
儀器 | 綠色 | 紅色 | 黃色 |
Vicam 4 系列熒光劑 | -0.50 | 6.0 | 2.8+/-0.3 |
②試驗準備
(1)標定熒光計。
(2)配制甲醇/水(80:20 體積比)溶液(每周配制一次,或根據需要配制)。
(3)配制1倍 PBS 洗液緩沖液:取100mL 的10倍 PBS,加入到900mL 純水中,即為1倍PBS緩沖液溶液。
(4)配制1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液:取100mL 的10倍濃縮液0.1%吐溫 PBS 緩沖液,加入到 900mL 純水中,即為1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液。
(5)配制 A+B 顯色溶液(每5天配制一次):用微量移液器取20μL 的顯色液B加入到顯色液A瓶中。不用時,一定要將 A+B 顯色溶液密封好,超過5天不能用。
(6)試劑空白試驗(1mL甲醇+1mL A+B顯色劑置于測試管中),熒光計讀數應為0。
(7)緩沖液空白試驗(2mL 1倍 PBS 緩沖液置于測試管中),熒光計讀數應為0。
③樣品提取
(1)稱取 50g 磨細的樣品,5g 氯化鈉,置于攪拌杯中。
(2)加入100mL 甲醇/水(80+20)溶液。
(3)蓋上攪拌杯的蓋子,高速攪拌1min。
(4)取下蓋子,將提取物倒入折疊式濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。
④提取物的稀釋
(1)移取10.0mL 上步的濾液,置于干凈的容器中。
(2)用40mL 1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液將濾液稀釋,混勻。
(3)將上步稀釋液通過玻璃微纖維濾紙(10m),濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL。
⑤分離柱色譜操作
(1)將上步10mL 濾液(4mL 相當于0.2g的樣品),以1～2滴/秒的流速全部通過FumoniTest 親和柱,直至空氣進入到親和柱中。
(2)將10mL 1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液以1～2滴/秒的流速通過親和柱。
(3)將10mL1倍 PBS 緩沖液,以1～2滴/秒的流速通過親和柱,直至空氣進入到親和柱中。
(4)用1.0mL HPLC 級的甲醇以1滴/秒的流速淋洗親和柱,將所有樣品淋洗液(1mL)收集于玻璃測試管中。
(5)將1.0mLA+B顯色劑加到測試管的淋洗液中。混勻后,將測試管置于已標定好了的熒光計中。240s 后,讀數。
⑥檢測限
0.25mg/kg,測定范圍:0～10mg/kg。