嘔吐毒素介紹
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，又稱為嘔吐毒素，屬單端孢霉烯族化合物。該毒素是F.鐮刀菌霉（主要是 F.graminearum h 和 F.culmorum）的二級代謝產物，化學名為3α，3β，7α，15-四羥基鑣草鐮刀菌-9-烯-8-酮。這類真菌大多在低溫、潮濕和收割季節，在谷物莊稼中慢慢生長。嘔吐毒素一般在大麥、小麥、玉米、燕麥中含有較高的濃度，在黑麥、高粱、大米中的濃度較低。下表列出了世界各地各種商品嘔吐毒素的存在情況。
嘔吐毒素在世界各地各種商品嘔吐毒素的存在情況
商品 | 國家 | 文獻發表年份 | 被分析樣品數 | 出現率/% | 含量范圍/(μg/kg) |
小麥 | 加拿大 | 1998 | 117 | 100 | 30~15790 |
玉米粉 | 英國 | 1998 | 40 | 98 | 50~5000 |
小麥 | 阿根廷 | 1997 | 40 | 80 | 300~4500 |
小麥 | 阿根廷 | 1997 | 60 | 93 | 100~9250 |
小麥 | 德國 | 1997 | 445 | 91 | 3~20538 |
大麥 | 德國 | 1997 | 240 | 81 | 2~4764 |
小麥 | 加拿大 | 1997 | 2311 | 33 | 10~10500 |
小麥制品 | 加拿大 | 1997 | 1257 | 43 | 10~4060 |
玉米 | 加拿大 | 1997 | 283 | 86 | 20~4090 |
DON 常常與其他真菌毒素同存，從谷物和飼料中分離出來的 DON 的最高濃度已達92mg/kg。業已證明，發霉玉米中的 DON 對豬會產生毒性，對人產生食物中毒性白細胞缺乏癥。動物飼料中嘔吐毒素的中毒癥狀表現為：厭食、嘔吐、消化道發炎、白血球下降、白尿、運動失調、內臟出血、中樞神經系統細胞變質，具有較強的細胞毒性，對血液及皮膚組織具有損害作用，細胞生長上表現出抑制蛋白質合成和 DNA 合成的作用。目前一些國家已制定了谷物中 DON 的限量標準，加拿大規定供人食用小麥中 DON 的限量標準為 2mg/kg，嬰兒食品為 1mg/kg，美國還未建立衛生標準，但在 1982 年建議當供人食用小麥制品中 DON 含量為 2mg/kg 時應引起關注，我國也建議供人食用的谷物中 DON含量不得超過 1mg/kg。谷物中 DON 的快速測定方法有免疫親和柱-熒光計快速分析法和酶聯免疫吸附測定法。
免疫親和柱熒光計快速分析法
(1)試劑與設備
①4-系列真菌毒素專用熒光計。
②均質器(250mL)。
③微量移液器(0.5mL,1.0mL)。
④渦流混合器。
⑤VICAM 嘔吐毒素親和柱。
⑥聚乙二醇(PEG),相對分子質量8000。
⑦色譜級甲醇。
⑧氯化鈉。
⑨VICAM 嘔吐毒素衍生液。
⑩VICAM 嘔吐毒素標定標準溶液一套:2個藍色、1個灰色、1個紅紫色。
(2)樣品的提取與過濾
①將樣品粉碎好,稱取50g,加入到均質杯中。
②加 5g 無碘鹽(NaCl)、10g聚乙二醇800(PEG)和150mL 的純水到均質杯中,高速攪拌1min,提取 DON。
③將注射器筒的下部密封好,用折疊式快速濾紙將濾液收集到注射器筒中,每個20mL。
(3)樣品的制備與培養
①將 VICAM 嘔吐毒素衍生液混勻(5～10s),用微量移液器分別取 500μL 加入到注射器筒中。
②將注射器筒仔細搖晃使溶液均勻。
4)柱色譜操作與測定
①將樹脂上面的提取液、標準液和衍生液以1～2滴/秒的流速通過柱子。一定要保證樣品和標準液均以同樣的流速進行操作,這個操作步驟大約需要 10min,如果只用了 9min 說明流速太快,分析結果的準確性會受到影響。
②10mL 純水以1～2滴/秒的流速清洗柱子。
③用10mL 純水以1～2滴/秒的流速再次清洗柱子。
④用2mL HPLC 級的甲醇以1滴/秒的流速淋洗柱子,將淋洗液收集到測試管中。
⑤混合均勻后,將測試管放入熒光計中進行測定。
⑥檢測限:0.50mg/kg,檢測范圍0～5.0mg/kg。