5.3.2常規條件下已知值質控血清變異（routine conditions variance-known value,簡稱RCVK）的測定。
做常規檢驗的技術人員，在常規檢驗的條件下，將質控血清放在常規檢測樣本中，進行20次檢驗，結果計算同OCV法。一般認為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內可以接受。若太大應該查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改進實驗室條件后（例如較正加樣器，糾正洗板操作，調正溫育溫度等），重新進行RCVK的測定。如果RCVK的SD值更小，說明OCV不是最佳條件下測定的，應重新再測OCV。常規條件下，RCVK肯定要比OCV大。通過質控控制各項條件，使RCVK的數據盡可能接近OCV值。RCVK的數據反映該實驗室日常工作的質量，用于作質控圖，對室內檢驗的結果進行控制，每日檢驗的結果，報告能否發出。
5.3.3常規條件下,未知值質控血清變異(routine conditions variancl-unknown value 簡稱RCVU)的測定
有時為了避免主觀性,再作RCVU測定。測定步驟同RCVK，但檢測的操作者不知質控血清的定值，或在操作者不知哪份是質控血汪清的條件下進行常規檢驗，以排除操作者的主觀性。在此不再舉例說明。
5.3.4質控圖
通過以上三步驟，可以開始作室內質控圖，根據RCVK的和SD作質控框圖。利用質控圖可以對每次檢驗的結果進行監測，當沒有更換另一批號試劑盒和另一批號質控血清時，該質控圖可以連續作下去。 質控血清的S/CO值低于-2SD的范圍,屬"告警"，應尋找原因并在質控圖上記錄查出的原因。
ELISA試驗中，各種檢驗項目的誤差允許范圍均有待在實踐中得出結論，以上只是舉例說明質控方法，不是定論。2SD是一般公認的允許誤差限度。每批測定放一份質控血清時，一次超過2SD應作為"告警"，二次超出2SD為"失控"。當質控過程中，出現失控時，出現失控時，應查找原因，通常是試劑盒或質控血清失效造成。更換試劑盒或更換質控血清，找出原因糾正后重新檢驗。如果檢驗結果仍達不到要求或找不到原 因時，應重復進行OCV的檢驗。如果OCV檢驗的結果仍是好的，說明常規操作出現問題。
一般認為：①一次超出3SD；②連續二次超出2SD；③3-5次連續處于一側的2SD之內；
④5～7次連續偏向橫軸的一側，均為失控。
第③、④種情況，單獨依靠記錄往往是不易察覺的，但在質控圖上可以清晰地發現這種失控。
5.3.5統計學計算方法--"即刻性"質控
以上介紹的質控方法基本上與臨床化學測定的質控方法相同，但ELISA有其特殊性，最合適的質控方法尚待研究建立。有些實驗室不是每天進行ELISA項目的檢驗，而ELSIA試劑盒效期短，用一批號試劑盒連續常規測20次，難度較大。采用"即刻法"質控統計方法，只需連續測3次，即可對第3次檢驗結果進行質控。"即刻法"的建立具體計算方法如下：
1)先將測定值從小到大排列
2)計算X和SD。
3)計算SDI上限和SDI下限值。
4)將SDI上限、SDI下限值與SDI值中的數字比較。當SDI上限值和SDI下限值＜n2SD時，表示處于控制范圍內，可以繼續往下測定，繼續重復以上各項計算；當SDI上限和SDI下限有 一值處于n2SD和n2SD值之間時，說明該值在2SD~3SD范圍，處于"告警"狀態；當SDI上限和SDI下限有一值＞n2SD時，說明該值已在3SD范圍之外，屬"失控"。數值處
于"告警"和"失控"狀態應舍去，重新測定該項質控血清和病人樣本。舍去的只是失控的這次數值，其他次測定值仍可繼續使用。
即刻性質控統計方法，適于ELISA測定的質控。
當檢測的數值超過20次以后，不必再使用"即刻法"質控統計計算，可以轉入常規的質控圖的質控。將前20次的數值求出的和SD作質控框架圖，第21次的數值，依次點入即可。
5.4室間質量評價（external quality assessment,簡稱EQA）
室間質量評價簡稱室間質評，是由質控中心采用一系列的辦法連續地、客觀地評價各實驗室的試驗結果，并發現室內質控不易發現的不準確性，了解各實驗室之間結果的差異，并幫助校正，使具有可比性。各實驗室試驗結果報到質控中心，經過統計分析，得出相互比較的結果。這種評價不能控制各實驗室每天發出的檢驗報告，而是一種回顧性評價。室內質控主要監測試驗結果的精密度，而室間質評主要控制試驗結果的準確度，不能互相替代。參與質評的實驗室應先做好室內質控。 5.4.1室間質評的方法
1、 發質控物進行調查
這是國內外室間質評的常用形式。部臨檢中心對乙肝標志物ELISA檢驗的室間質評采用定期發放質控物至各實驗室，各實驗室在規定的日期進行檢驗，并將檢驗結果報至部臨檢中心。部臨檢中心經統計分析，將評價結果寄回各實驗室。通過評價，各實驗室了解本室工作質量，發現差距，并設法改進，以不斷提高檢驗質量。
這種評價方式有一定缺點，即各實驗室常對質控物特殊對待，在檢驗時選用特殊試劑盒，選派特別的技術員進行檢驗，有的實驗室互相和對結果并作修改。這就使EQA的結果不能反映該實驗室日常工作水平。
2、 派觀察員到實驗室進行試劑調查
這種調查事先不通知，臨時派觀察員到實驗室，指定采用常規方法，檢驗規定的一組標本，進行評價。
這種調查方式，容易發現該實驗室存在的實際問題，可以直接給予指導和幫助，解決問題，提高檢驗質量。這種調查通常可以使用真實樣本，避免采用質控物的一些缺點。
6、ELISA試劑的臨床質量評價
ELISA試劑的評價（evaluation）分兩個方面：一是試劑本身的質量評價，符合一定要求后才能生產供應；一是在臨床應用中效果的評價。以肝炎ELISA診斷試劑為例，首先必須通過中國藥品生物制品檢定，以得到生產的許可。檢定內容除包裝、標簽、說明書等外，對試劑的性能，如特異性、靈敏度、精密度和線性等均需逐項檢定，通過對一系列參比品的檢測，結果符合要求者才為合格。ELISA試劑的臨床質量評價是用該試劑對臨床樣本進行檢測，以觀察其實際應用價值。部臨檢中心對乙肝ELISA診斷試劑在這方面進行了工作，通過質量評價，促進了試劑質量的提高。
6.1 診斷試劑臨床質量評價要點
從臨床應用角度考核檢驗試劑的可靠性，是以其能否區分健康與疾病的能力作為依據的。目前還很難找到100%可靠的試驗，任何試驗都會出現假陽性或假陰性。判斷試驗的可靠性常以其靈敏度及特異性作為考核標準。臨床應用的靈敏度用疾病患者試驗陽性的百分率表示，特異性以無病者試驗陰性的百分率表示。進行這種評價，首先需要收集有關的病人血清，然后用公認的檢測該項標志物最可靠的試劑進行測定，以確定其為陽性或陰性。
這一組表明測定物為陽性或陰性的血清組成"血清盤"（panel）。被評價的試劑測定此血清所得結果與血清盤標明的結果的關系如下表：
血清盤結果 合計
＋ －
受檢試劑結果 ＋ a b a+b
－ c d c+d
合計 a+c b+d A+b+c+d
表中a為真陽性，b為假陽性，c為假陰性，d為真陰性。
被評價試劑的各項性能指標按以下分式計算：
靈敏度(%)=a/(a+c)×100%
特異性(%)=b/(b+d)×100%
符合率(%)=(a+d)/(a+b+c+d) ×100%
一般認為靈敏度或特異性>90%為良好。符合率是綜合靈敏度和特異性的指標。
6.2 臨床考核血清盤的制備要求
1、 采用人的原血清；
2、 血清盤應具有相應的穩定性；
3、 血清盤中樣本不含防腐劑，或只含極微量的、不影響檢驗結果的防腐劑；
4、 血清盤所包含的陰性樣本和陽性樣本約各占一半；
5、 陽性樣本中，應有一定數量的強陽性和弱陽性樣本；
6、 血清盤中應有一定數量的臨界值上、下含量的樣品，以檢驗試劑的靈敏度。
7、 血清盤中應包含與該項檢驗相關的病種樣本和已積知具有干擾物質（RF因子）的樣本，以檢驗試劑的特異性。
6.3 臨床考核血清盤的建議
以抗-HBc-IgM為例，部臨檢中心收集近百例臨床肝炎病人的樣本，經美國abbott公司抗-HBc-IgM試劑反復檢驗篩選。選出血清70份，其中陽性29份，陰性41份，組成抗-HBc-IgM臨床考核血清盤。在70份樣本中，除7份為無病歷的質控血清外，抗-HBc-IgM陽性的22份樣本中含臨床診斷急性肝炎16例、慢性活動性肝炎5例、重癥肝炎1例；抗-HBc-IgM陰性的40份樣本中，含臨床診斷慢性遷延性肝炎24例、急性肝炎例（均為恢復期采的血樣）、慢性活動性肝炎8例（其中5例為恢復血樣）。
因此，這套抗血清盤用于商品試劑的臨床考核，可以將臨床上乙肝急性期、慢性活動期病人區分開，具有臨床診斷意義。