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  • 發布時間:2019-03-28 15:52 原文鏈接: 免疫沉淀實驗——免疫沉淀放射性標記抗原

    實驗材料

    蛋白質

    試劑、試劑盒

    SDS

    儀器、耗材

    離心機

    實驗步驟

    1.  按基本方案進行,但以下說明的操作步驟已經修改:

    (2b)按所需選用步驟4b所提供的其中之一備擇物(①,②,③)預澄清放射性抗原溶液。

    (4b)加入1 μl 抗原特異性抗血清,或3 μg 抗原特異性單抗,或抗質特異性雜交瘤培養上 清(克隆化細胞系來源的加30 μl,未克隆化來源的加100 μl)。然后按①,或②、或③進行操作:


    ①加入1:1抗Ig抗體-Sepharose偶聯物膠漿/稀釋緩沖液。

    ②加入1:1蛋白A或G-Sepharose膠漿/稀釋緩沖液。


    ③用裂解緩沖液離心洗滌10%金黃色葡萄球菌Cowan Ⅱ菌株體渾濁液,以稀釋緩沖液重懸至10%濃度,加入50 μl 此懸濁液,于4℃振蕩10 min。

     

    (5b)按基本方案洗滌免疫沉淀物,但來自①或②形成的沉淀,以200 g 離心1 min,而來自③的,1000 g 離心7 min。

    (6b)加入20~50 μl SDS樣品緩沖液。先不用旋渦混合器旋起混勻,否則瓊脂糖或細菌會粘在液面上的管壁。蓋緊蓋子,在100℃保溫5 min,用旋渦混合器旋起,微量離心機離心后,將混合物加樣于凝膠,如基本方案步驟7進行分析。

    展開


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