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  • 發布時間:2019-03-28 15:51 原文鏈接: 免疫沉淀實驗——抗Ig血清免疫沉淀放射性標記抗原

    實驗材料

    蛋白質

    試劑、試劑盒

    SDS

    儀器、耗材

    離心機搖床

    實驗步驟

    1.  按基本方案進行,但以下說明的操作步驟已經修改:

     

    (2a)按每毫升加入2 μl 正常血清的量對放射性標記抗原進行預澄清處理,加入適量的抗血清,于4℃放置12~18 h, 111 000 g 離心10 min,保留上清。

     

    (4a)加入1 μl 抗原特異性抗血清,3 μg 抗原持異性純化單抗,或抗原特異性雜交瘤培養上清(克隆細胞系來源的加30 μl 或未克隆細胞系來源的加100 μl),用漩渦混合器混勻,于4℃放置2 h。然后加入合適量的抗血清,旋渦混合器混勻后,于4℃放置12~18 h。

     

    (5a)按基本方案洗滌免疫沉淀物,但以1 000 g 離心7 min。

     

    (6a)加入20~50 μl SDS樣品緩沖液,不要旋起,否則免疫沉淀物會粘在液面上的管壁。 蓋緊蓋子,對免疫沉淀物、先在56℃保溫1 h,然后在100℃保溫5 min。將混合物加樣于凝膠,如基本方案步驟7進行分析。

    展開


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