(1)收獲細胞,加入適量細胞IP裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g離心30 min后取上清;
(2) 取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液將1μg相應的抗體和10-50 μl protein A/G-beads加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;
(3)免疫沉淀反應后,在4°C 以3,000 g速度離心5 min,將protein A/G-beads離心至管底;將上清小心吸去,protein A/G-beads用1ml裂解緩沖液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 加樣緩沖液,沸水煮10分鐘;
(4)SDS-PAGE, Western blotting或進行質譜分析。