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  • 發布時間:2022-11-15 14:52 原文鏈接: 免疫沉淀的實驗步驟

    (1)收獲細胞,加入適量細胞IP裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g離心30 min后取上清;

    (2) 取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液將1μg相應的抗體和10-50 μl protein A/G-beads加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;

    (3)免疫沉淀反應后,在4°C 以3,000 g速度離心5 min,將protein A/G-beads離心至管底;將上清小心吸去,protein A/G-beads用1ml裂解緩沖液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 加樣緩沖液,沸水煮10分鐘;

    (4)SDS-PAGE, Western blotting或進行質譜分析。


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