通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達進行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠T細胞表面檢測到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠T細胞表面檢測到hTNFR2。
通過流式細胞術對野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠中TNFR2蛋白表達進行分析。用抗小鼠CD3ε抗體體內刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2純合鼠，收集脾細胞，并用種屬特異性抗TNFR2抗體進行流式細胞術分析。結果顯示：在C57BL/6小鼠Treg細胞表面檢測到mTNFR2，在B-hTNFR2純合鼠Treg細胞表面檢測到hTNFR2。
B-hTNFR2小鼠的白細胞亞群分析
從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。
結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響T，B，NK，粒細胞，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。
從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。
從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出淋巴結細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響T，B，NK細胞的分化。
從C57BL/6和B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出淋巴結細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。結果表明，純合B-hTNFR2小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hTNFR2的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。
TNFR2抗體與B-hTNFR2純合鼠T細胞結合分析
從B-hTNFR2小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試TNFR2抗體與脾細胞的結合。
從anti-mCD3ε(0.2或1μg/mL)和anti-mCD28(1μg/mL)體內刺激的B-hTNFR2小鼠分離出脾細胞。單個活細胞用CD45圈門后用于進一步的分析。如圖所示，與同型對照抗體(hIgG)相比，hTNFR2 Ab2與B-hTNFR2純合鼠的T細胞是結合的。在anti-mCD3ε(0.2μg /mL)刺激條件下，mTNFα增強了hTNFR2 Ab2與B-hTNFR2純合鼠的T細胞結合，這表明mTNFα/hTNFR2信號通路在B-hTNFR2純合鼠中是可行的。
TNFR2抗體藥效驗證
將鼠結腸癌MC38細胞皮下植入純合的B-hTNFR2小鼠中，當腫瘤體積達到約100 mm3時，對小鼠進行分組，然后使用抗人類TNFR2抗體進行治療。與對照組相比，兩種人TNFR2抗體以不同程度抑制腫瘤生長，證實B-hTNFR2小鼠模型是體內TNFR2抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。
參考資料
[1]Faustman D, Davis M. TNF receptor 2 pathway: drug target for autoimmune diseases. Nat Rev Drug Discov 2010, 9(6): 482-493.
[2]Torrey H, Butterworth J, Mera T, Okubo Y, Wang L, Baum D, et al. Targeting TNFR2 with antagonistic antibodies inhibits proliferation of ovarian cancer cells and tumor-associated Tregs. Sci Signal 2017, 10(462).