免疫球蛋白標記技術_125I標記單克隆抗體技術

McAb125I

磷酸緩沖液氯胺桾偏重亞硫酸鈉KIBSA

超凈臺γ計數儀PD10柱

1.  在細胞凍存管內加入純化的McAb100 μg/100 μl，再加入10 μl 0.05 M磷酸緩沖液，再加入10 μl（含1 mCi）¹²⁵I

2.  加入10 μl氯胺-T（5 mg/ml溶于0.05 M磷酸鹽緩沖液），孵育時間不超過30秒

3.  加入100 μl偏重亞硫酸鈉（1.2 mg/ml溶于0.05 M磷酸緩沖液）

4.  加入200 μlKI溶液（少許結晶KI溶于0.05 M磷酸緩沖液＋4 ％牛血清白蛋白）

5.  用PD10柱（Sephadex G25）除去游離¹²⁵I。用4 ％BSA、PBS洗脫

6.  分部收集，0.5 ml/管。每管取5 μl進行γ計數，計算標記抗體的比活性和標記率
 

　　　　　 結合于McAb¹²⁵I放射性強度（cpm）

標記率（％）＝───────────────────

　　　　　　　　　總放射性強度（cpm）

　　　　　　　　　　
　　　　　　
                                 結合于某一管McAb上的放射性強度

比活性（μCi/μgMcAb）＝────────────────

　　　　　　　　　　　　　某一管McAb總量

1.  嚴防同位素污染，工作人員必須穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必須在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對實驗室環境進行監測。所用¹²⁵I和標記物應妥善保管。

　
2.  如標記細胞因子、激素等，應選用更溫和的標記方法，使保持更好的生物學活性。