一般情況下，單 克 隆 抗 體（尤其是大鼠源性）不能用 蛋 白A 或 蛋 白 G 交聯瓊脂糖凝膠層析純化，在此情況下，可使用抗大鼠Ig 輕鏈單克隆抗體交聯瓊脂糖凝膠層析柱來結合組織培養上清或腹水中的大鼠單克隆抗體，然后用逐步降低洗脫液p H 的方法來確定從抗Ig柱上洗脫大鼠抗體的最溫和洗脫條件。 附 加 材 料（其他材料見基本方案2)小鼠抗大鼠/ c鏈 MAb: 用 蛋 白 A 交聯瓊脂糖凝膠純化的MAR18.5 (ATCC) (見基本方案2) 溴化氰活化的瓊脂糖凝膠CL-4B (單元12. 2; Pharmacia Biotech) 結合緩沖液：0.05mol/L Tris ?HCl (附錄 I ) /0.15mol/L
NaCl/0.02% (m/V ),NaN3， pH8. 6 待純化的大鼠抗體粗提液（MAb上清或腹水，單 元 I.4) PH7.0 洗脫緩沖液： 0.05mol/L 磷 酸 鈉（附錄 I) /0. 15mol/LNaCl/0.02% (m/V),NaN3， pH7. 0 pH5.5 洗 脫 緩 沖 液 ： 0.05mol/L 檸 檬 酸 鈉 / 0.15mol/L NaCl/0.02% (m/v) NaN3， pH5. 5 pH4. 3 洗 脫 緩 沖 液 ： 0 ?05mol/L 乙 酸 鈉 / 0 ?15mol/L NaCl/0. 02 % (m/V )NaN3， pH4. 3 pH2. 3 洗 脫 緩 沖 液 ： 0 ?05mol/L 甘 氨 酸 /0?15mol/L NaCl/0. 0 2 % ( m/V )NaN3， pH2. 3 1.將≥1 0 mg純 化 后 的 MAR18. 5 抗體與溴化氰活化的瓊脂糖凝膠4B 共價偶聯， Iml濕凝膠約可以偶聯IOmg左 右 的 MAR18. 5 抗 體 ，此 柱 可 結 合 Img左 右 蛋 白 質（單元 12. 2)，將偶聯的凝膠在4°C或室溫下用結合緩沖液沖洗。 2.提 純 腹 水 或 M A b上 清（見 備 選 方 案 1 ，步 驟 I a 或 lb) ，將含大鼠抗體粗提液的IOml左右腹水或IOOml左 右 MAb上清上樣。 3.用 10?1 5 倍柱體積的結合緩沖液洗柱，監 測 A280值 ，使其回到基線水平，放置組分收集器準備收集洗脫液。 4.分別用以下洗脫液各洗脫5 個柱體積，在用下一個洗脫液之前要確定A280已回到基線。 pH7. 0 洗脫緩沖液 pH5. 5 洗 脫 緩 沖 液（某些抗體會洗脫） P H 4. 3 洗 脫 緩 沖 液（多數抗體會洗脫） P H 2. 3 洗 脫 緩 沖 液（所有抗體會洗脫，洗 到 A280回到基線） 5.用≥1 0 個柱體積的結合緩沖液平衡層析柱，置 于 4°C保存。 6。鑒定洗脫的蛋白質峰（包括未結合的洗脫組分），合并各洗脫液，檢測抗體活性，如有必要，可 將 其 濃 縮 （見基本方案1 ，步 驟 6)。 展開 | 