免疫電泳實驗

免疫電泳的基本原理是將電泳和瓊脂免疫擴散結合起來應用，即先將蛋白質抗原在瓊脂內進行電泳，使分離成不同的電泳區帶，然后在一定距離的抗體槽內加入抗血清，使進行免疫擴散沉淀反應，這樣，每一電泳區帶又可能產生一個以上的沉淀線條。因而此法克服了單純瓊脂擴散方法中的沉淀線重疊成束，不易鑒別的缺點，大大提高了瓊脂擴散試驗的分析能力。

某種可溶性抗原和相應抗體

1％ 離子瓊脂巴比妥緩沖液

電泳儀電泳槽打孔器2 mm 直徑的圓形薄壁金屬管開瓊脂長槽用的手術小刀毛細滴管或微量加樣器注射針頭

1. 取清潔無劃痕的普通載玻片，放在水平位置。

2. 用刻度吸管吸取溶化并已冷至 50～60℃ 的 1％ 離子瓊脂 3.5～4 ml 左右，加在上述載玻片上，使均勻布滿玻片，待凝固。

3. 用金屬圓形管按圖 1 打孔，用注射針頭挑去瓊脂。

圖 1　免疫電泳瓊脂板模型

4. 用毛細滴管或微量加樣器在上孔加雞血清，下孔加鵝血清。

5. 電泳

將瓊脂板移至電泳槽上，電泳槽中放 pH 8.6 離子強度 0.075 mol/L 的巴比妥緩沖液，瓊脂板的兩端各用四層紗布與緩沖液搭橋。接通電源，電流為 4～6 mA/cm，電壓為 10～12 V/cm。電泳時間為 45 min至 1.5 h，亦可在抗原中加些溴酚藍作為標志，當溴酚藍泳動到距瓊脂板末端 1 cm 處，即關閉電源。

6. 取出瓊脂板，用手術小刀按圖 1 在中央挖一長槽，用注射針頭挑去瓊脂。

7. 在長槽中加入抗雞血清的免疫血清，然后將瓊脂板放入內有幾層濕紗布的帶蓋搪瓷盤中，37 ℃ 下擴散 24 h。