（一）在酶標記免疫電鏡檢查中較常碰到的非特異性染色及其清除方法：
1. 基底染色：某些組織、細胞常帶正電荷，而抗體分子則帶負電荷。由于靜電吸引作用，在組織和細胞中會出現非特異性抗原所在部位的抗原抗體復合物，造成非特異性染色，稱為基底染色。最易造成基底染色的有膠原纖維、結締組織和變性壞死的細胞等。
防止出現基底染色的方法是在用第一抗體孵育前，先用20%制備第二抗體的同種動物正常血清或2%牛血清白蛋白溶液對待檢的組織或細胞孵育30 min。這樣可明顯地減少基底染色。用于封閉非特異性吸附的血清必須無溶血現象，否則，紅細胞內的血紅蛋白等可與過氧化物酶的底物發生顯色反應而出現假陽性。此外，若所用的抗體純度較低、濃度偏低、每步操作后洗滌不足、加底物溶液后反應時間過長等都可導致或加深基底染色。
2. 內源性過氧化物酶：最常因內源性過氧化物酶而引起假陽性檢查結果的是血紅蛋白。此外，中性粒細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞等都含有過氧化物酶，亦可造成檢查結果假陽性。于檢查前除去細胞中過氧化物酶類的方法是：①用 1%H2O2處理待檢標本 30 min ②用新鮮配制的 0.5%過氧化氫甲醇溶液處理15分鐘；③用 0.01%過碳酸溶液處理 10 min, 再加 0.01% 繃氫化鈉水溶液處理 10分鐘，以除去過碳酸產生的醛類；④在二氨基聯苯胺底物－過氧化氫溶液中加入疊氮鈉 (NaN3) 溶液，最終濃度為 0.005mol/L 。
3. 內源性生物素：在組織標本中可存在生物素，做生物素－親合素免疫染色時，可產生非特異性染色。解決的辦法是于檢查前先用 2-甲基-D-甘露糖背鈍化組織中的生物素，使它們失去生物學活性。
（二）酶標免疫染色特異性對照觀察
如同其他實驗室檢查項目一樣，為了提高免疫透射電鏡檢查的特異性和準確性，必須作一些檢查對照。
1. 陰性對照： ①檢抗原或抗體的陰性對照：用肯定不含待檢抗原或抗體的組織、細胞等標本進行免疫透射電鏡檢查，結果必須陰性；②無任何抗體的陰性對照：在整個免疫透射電鏡的檢查操作中，不加入任何抗體，結果應為陰性。若仍為陽性，則多因非特異性吸附、存在內源過氧化物酶或生物素所致；③同種動物正常血清的陰性對照：在免疫透射電鏡檢查操作中，用制備抗體的同種動物正常血清代替抗體，結果應為陰性。
2. 陽性對照：在免疫透射電鏡檢查操作中，加人待檢的特異性抗原或抗體，結果必須陽性。 展開 | 