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  • 發布時間:2019-07-07 15:24 原文鏈接: 免疫組化非特異性背景染色及其控制方法

    一、非特異性染色的識別
    常出現在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處。表現為彌漫性,均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽性反應產物點、團或塊狀。
    二、非特異性染色的原因
    1. Ig與Fc受體結合
    多見于冰凍切片(特別是淋巴造血組織,淋巴細胞,單核細胞,組織細胞表面多),主要是和二抗反應,因為一抗一般稀釋度均較大,因此Fc受體的干擾基本不存在。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體,所以石蠟切片不多見。
    避免方法:
    ① 用以二抗相同種族的正常血清封閉切片;
    ② 用不含Fc段的抗體,但價格貴
    (V區,C1區不含Fc段,用Pepsin消化)

    2.靜電吸附
    抗體是一種帶負電荷的球蛋白,容易和帶正電荷的組織相結合,如膠原纖維。

    避免方法:
    ① 盡量稀釋一抗
    ② 降低抗體的電荷,如用2.5%NaCl,0.05mTBS代替PBS;
    ③ 用去垢劑 如triton-100處理切片。 Tween-20等;

    3.二抗與組織中的Ig結合
    如羊抗兔的二抗,二抗可以標本中(人)Ig發生交叉反應,科學上越接近的動物,交叉反應越
    明顯,如人與猴,兔與豚鼠。
    避免方法:用與待測組織相同的5%的正常血清稀釋二抗。如人血清。

    4.組織中殘存醛基與Ig的結合
    如醛類固定后未能徹底的沖洗,殘流醛基可以和Ig結合。
    避免方法:
    ①徹底沖洗;
    ② 0.02%的新鮮的硼氧化鉀液處理10分鐘后沖洗;

    5.內源性過氧化物酶
    紅細胞,粒細胞的含量尤其高,鏡下可以識別,不要將其當成陽性結果。
    避免方法:
    ① 石蠟切片 0.3%雙氧水-甲醇溶液處理切片;
    ② 冰凍切片 3%雙氧水處理切片5分鐘(99:1)因為未經固定包埋,大部分酶未被破壞;
    ③ 對于骨髓涂片
    最好用非過氧化物酶標記的抗體
    如堿性磷酸酶(AP)

    磷酸萘酯+水→α-萘酚+偶氮染料

    快蘭(fast blue)或快紅(fast red)
    ↓ ↓ 
    蘭色 紅色
    用明膠甘油封片,不能用含二甲苯的封片劑,溶于二甲苯。

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