免疫組織化學常用的檢測方法

  免疫組織化學（immunohistochemistry）技術的基本原理是抗原-抗體的反應。利用帶有標記物（如熒光素或辣根過氧化物酶等）的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(如蛋白質、多肽、酶、激素、病原體以及受體等)。

免疫組織化學常用的檢測方法有ABC法、SP法等，這些方法的工作原理大同小異：

1.ABC法：首先按一定的比例將親和素與酶標的生物素結合在一起，形成親和素-酶標生物素復合物，即ABC復合物。*抗體不被標記，以生物素標記第二抗體，標記的二抗與復合物結合。染色步驟依次為*抗體、生物素標記的第二抗體、ABC復合物，zui后進行酶顯色反應。由于親和素對生物素有極強的特異性結合力，具有多價性，產生多級放大，從而提高了生物反應的敏感性和特異性。

2.SP法：染色步驟依次為*抗體、生物素標記的第二抗體、酶標記的親和素，zui后進行酶顯色反應。Vectorlabs公司的SP法試劑盒，可進行快速染色（15分鐘），具有同ABC試劑盒同樣的優點，操作過程更為簡單。

3.非生物素-親和素方法：免疫組化染色實驗過程中，在選擇使用生物素-卵白素或生物素-鏈霉菌卵白素檢測系統時(如ABC、LSAB、SP法)，由于有些組織和器官 ,如肝、腎、腦、胰、乳腺、脂肪、子宮內膜和骨骼肌組織等(如腺上皮組織)內源性生物素含量比較高，特別在

    使用高溫加熱修復方法暴露抗原決定簇后，組織內源性生物素大量暴露，容易造成假陽性。Vectorlabs公司開發的ImmPRESS超敏聚合酶-抗體檢測試劑，具有快速、敏感和背景清晰等特點。其原理是：采用新的聚合酶方法，將多個酶分子通過化學鍵偶聯至有機物骨架上形成酶聚合物，再與抗體偶聯，從而減少操作步驟，節省了時間。并避免了傳統的以右旋糖酐或其它高分子材料為骨架所導致的空間位阻以及生物素-親和素內源性干擾的不足。

4.免疫熒光：免疫熒光技術的原理基本相同，只是用熒光素作為顯色系統。使用熒光標記抗體，直接定位、定性檢測組織或細胞蛋白表達情況。較免疫組化具有靈敏度高、操作簡單的優點。缺點是染色組織片不能長期保存。

5.免疫雙重或多重標記法：用不同顏色的熒光素或酶，來標記不同的抗原；（1）使用相同的酶系，選用不同的底物來檢測每一個抗原；（2）使用不同的酶系，選用其相應的底物來檢測每一個抗原。