交叉反應原因
指抗體除與其相應的抗原發生特異性反應外還與其它抗原發生反應。產生的原因有以下幾個方面:
1. 抗原特異性指用于免疫動物的抗原性物質中含有多種抗原分子,它引起動物產生針對多種抗原分子特異性的相應抗體。任何其它物質只要含有一種或多種與上述物質相同的抗原分子,必將與上述多特異性的抗血清發生交叉反應。
2. 共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。
3. 決定簇相似,兩種不同的抗原決定簇,如果結構大致相同,由于空間構象關系,某一決定簇的相應抗體可以與大致相同的決定簇發生交叉反應。當然抗原一抗體之間構象相似時的結合力小于吻合時的結合力。
多抗和單抗特性比較
1.均一性。一種單抗中,每個抗體的化學結構和氨基酸順序都相同,只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物,不同時期所得到的多抗,各有不同的化學組成。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物。
2. 穩定性。單抗的穩定較差,對PH變化敏感,對熱不穩定,提純過程中易變性,而多抗的穩定性則較好。
3.特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇,所以用它進行血清學反應時,特異性強,敏感性高,一般不發生交叉反應。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結合,所以特異性較差,較易引起交叉反應。
4.重復性。單抗的重復性好,而多抗每批都不一樣。
5. 沉淀反應。多抗由于與抗原多價結合容易形成網絡樣沉淀,而單抗只與抗原結合產生二聚體,不能直接形成抗原抗體沉淀物。
抗體保存
抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低(10-100mg/L),就應另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附,隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數已稀釋的抗體應存在4℃-8℃條件下,以免凍融對抗體蛋白產生有害效應。
抗體原液和已分離的免疫球蛋白組分應保存于-20℃條件下,并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應置于室溫中緩慢地解凍,應絕對避免用高溫快速解凍。被細菌污染的抗體常會出現假陽性結果,應將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細菌污染,可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉。
抗體經真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數稀釋抗體可進行冷凍保存,少數抗體可能會丟失抗原活性。大多數單抗,只要蛋白濃度適當,可在4℃下保存數月。