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  • 發布時間:2021-10-14 13:17 原文鏈接: 免疫膠體金技術的使用優點及顆粒制備

      使用優點

      (1)使用方便快速,便于基層使用和現場使用,所有反應能在15分鐘內完成;

      (2)成本低,不需要特殊的儀器設備;

      (3)應用范圍廣,可適應多種檢測條件;

      (4)可嗄以進行多項檢測,若陽性樣本比較難獲得,多項檢測可以節省樣品,降低成本;

      (5)標記物穩定,標記樣品在4℃貯存兩年年以上,無信號衰減現象;

      (6)膠體金本身為紅色,不需要加入發色試劑,省卻了酶標的致癌性底物及終止液的步驟,對人體無毒害。

      顆粒制備

      根據不同的還原劑可以制備大小不同的膠體金顆粒。常用來制備膠體金顆粒的方法如下。

      1.枸櫞酸三鈉還原法

      (1)10nm膠體金粒的制備:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加入1%枸櫞酸三鈉水溶液3ml,加熱煮沸30min,冷卻至4℃,溶液呈紅色。

      (2)15nm膠體金顆粒的制備:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加入1%枸櫞酸三鈉水溶液2ml,加熱煮沸15min~30min,直至顏色變紅。冷卻后加入0.1Mol/L K2CO30.5ml,混勻即可。

      (3)15nm、18nm~20nm、30nm或50nm膠體金顆粒的制備:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加熱煮沸。根據需要迅速加入1%枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml,繼續煮沸約5min,出現橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18~20nm、30nm和50nm。

      2.鞣酸—枸櫞酸鈉還原法

      A液:1%HAuCl4水溶液1ml加入79ml雙餾水中混勻。

      B液:1%枸櫞酸三鈉4ml,1%鞣酸0.7ml,0.1Mol/L K2CO3液0.2ml,混合,加入雙餾水至20ml。

      將A液、B液分別加熱至60℃,在電磁攪拌下迅速將B液加入A液中,溶液變藍,繼續加熱攪拌至溶液變成亮紅色。此法制得的金顆粒的直徑為5nm。

      3.制備高質量膠體金的注意事項

      (1)玻璃器皿必須徹底清洗,最好是經過硅化處理的玻璃器皿,或用第一次配制的膠體金穩定的玻璃器皿,再用雙餾水沖洗后使用。否則影響生物大分子與金顆粒結合和活化后金顆粒的穩定性,不能獲得預期大小的金顆粒。

      (2)試劑配制必須保持嚴格的純凈,所有試劑都必須使用雙餾水或三餾水并去離子后配制,或者在臨用前將配好的試劑經超濾或微孔濾膜(0.45mm)過濾,以除去其中的聚合物和其它可能混入的雜質。

      (3)配制膠體金溶液的pH以中性(pH7.2)較好。

      (4)氯金酸的質量要求上乘,雜質少。最好是進口的。

      (5)氯金酸配成1%水溶液在4℃可保持數月穩定,由于氯金酸易潮解,因此在配制時,最好將整個小包裝一次性溶解。

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