一些基本概念和基本知識:
1 熒光免疫測定技術的概念:將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記,試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后,測定復合物中的熒光素,這種免疫技術,稱為免疫熒光素技術。
2.技術分類:
⑴熒光抗體技術(熒光顯微鏡技術)
抗原抗體反應后,利用熒光顯微鏡判
定結果的檢測方法。
⑵ 免疫熒光測定技術:
抗原抗體反應后,利用特殊儀器測定
熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法
3.熒光的產生:
物質吸收外界能量而進入激發狀態,在回復基態時多余的能量以電磁輻射的形式釋放,即發光,這種光稱為熒光。
這種物質,稱為熒光素
由光激發所引起的熒光,為光致熒光
------熒光免疫技術
由化學反應所引起的熒光,為化學熒光
------化學發光技術
4.熒光素的熒光特性:
⑴ 停止供能,熒光現象隨即終止
⑵ 對光的吸收和熒光的發射具高度選擇性
入射光波長<發射光波長
⑶ 熒光效率: 發射熒光的光量子數
熒光效率=-------------------------------
吸收光的光量子數
⑷ 熒光猝滅現象:熒光素的輻射能力減弱
5.常見熒光素:
⑴ FITC
⑵ RB200
⑶ TRITC
⑷ 鑭系:Eu、Tb
⑸ PE
⑹ 其它
常見熒光素的特性:
⑴ FITC:黃色結晶粉末,吸收光:490~495nm,
發射光:520~530nm,明亮的黃綠色熒光。
⑵ RB200: 橘紅色粉末, 吸收光570nm,發射光
595~600nm,橘紅色熒光。
⑶ TRITC: 紫紅色粉末,吸收550nm,發射光
620nm,橙紅色熒光。