間接法是根據抗球蛋白試驗的原理,用熒光素標記抗球蛋白抗體(簡稱標記抗抗體)的方法(圖）。
間接法的檢測過程分為兩步:
第一步,用未知未標記的抗體(待檢標本)加到已知抗原標本上,在濕盒中在37℃下保溫30min,使抗原抗體充分結合,然后洗滌,除去未結合的抗體;第二步,加上熒光標記的抗球蛋白抗體或抗IgG、IgM抗體。
如果第一步發生了抗原抗體反應,標記的抗球蛋白抗體就會和已結合抗原的抗體進一步結合,從而可鑒定未知抗體。由于結合在抗原-抗體復合物上的熒光素抗體增多,發出的熒光亮度強,因而其敏感性強。
此外,它只需制備一種熒光抗體就可以檢出多種抗原,能用于檢測多種動物的多種抗原-抗體系統,而且能解決一些不易制備動物免疫血清的病原體(如麻疹)等的研究和檢查。
此方法的缺點是易產生非特異性熒光,影響結果判斷。
