1）熒光染色后一般在1h內完成觀察，或于4℃保存4h，時間過長 ，會使熒光減弱。
2）每次試驗時 ，需設置以下三種對照：
① 陽性對照：陽性血清+熒光標記物
②陰性對照：陰性血清+熒光標記物
③ 熒光標記物對照：PBS+熒光標記物
3）已知抗原標本片需在操作的各個步驟中，始終保持濕潤，避免干燥。
4）所滴加的待檢抗體標本或熒光標記物，應始終保持在已知抗原標本片上，避免因放置不平使液體流失，從而造成非特異性熒光染色。
