基 本 方 案 1 單細胞表面抗原的免疫熒光標記材 料
基 本 方 案 2 固定和滲透單細胞的細胞內抗原的免疫熒光標記材 料
輔 助 方 案 1 用 異 硫 氰 酸 熒 光 黃（FITC) 偶聯抗體材 料
6 . 計算熒光素/蛋 白 質 比（F/P ):
F/P = F I T C 摩爾數/蛋白質摩爾數； F/P = 5 : 1?6 : 1 最適于流式細胞儀使用。 輔 助 方 案 2 長臂生物素偶聯抗體遵 循 F I T C 偶 聯 方 法（見輔助方案 1)，替換以下試劑和步驟見特別說明。
附 加 材 料（其 他 材 料 見 輔 助 方 案 1 ， 帶 V 項 目 見 附 錄 1) V 琥珀酰亞胺乙酯標記緩沖液
10m g /m l 長 臂 生 物 素（long-armed Biotin， Z y m e d 公司）溶 于 D M S O ，臨用前配制
1 . 用 與 F I T C 偶聯相同的方法透析 1?2m g /m l 的純化抗體。在透析時，用琥珀酰亞胺
乙 酯 標 記 緩 沖 液 代 替 F I T C 標 記 緩 沖 液 。在 A 28。處 檢 測 吸 光 度 ，確 定抗體濃度
( = A 280 X 0.74 X 稀釋倍數）。
2 . 每毫克抗體加入 IOm I 的 lOmg/m l 用 無 水 D M S O 配制的長臂生物素。室 溫 孵 育 lh。
用 與 F I T C 相同的方法去除未結合的生物素（見輔助方案 1)。 備 選 方 案 1 未固定細胞胞內抗原的免疫熒光檢測附 加 材 料
備選方案 2 用 7-氨基放線菌素 D (7-A A D ) 標記死細胞附 加 材 料
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