2．方法步驟
（1）涂片或切片固定。
（2）吸取經適當稀釋之免疫血清及補體之等量混合液（此時免疫血清及補體又都稀釋一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定濕度的染色盒內。
（3）用緩沖鹽水洗2次，攪拌，每次5min，吸干標本周圍水液。
（4）滴加經過適當稀釋之抗補體熒光抗體30min，37℃，水洗同（3）。
（5）蒸餾水洗1min，緩沖甘油封固。
3．對照染色
（1）抗原對照。
（2）抗血清對照：用正常兔血清代替免疫血清。
（3）滅活補體對照：將補體經56℃30min處理后，按補體同樣比例稀釋，與免疫血清等量混合后，進行補體法染色。
本法之熒光抗體不受免疫血清的動物種屬的限制，因而一種熒光抗體可作更廣泛的應用，敏感性亦較間接法高，效價低的免疫血清亦可應用，節 省免疫血清，尤其是對檢查形態小的如立克氏體、病毒顆粒等或濃度較低的抗原物質時甚為理想。
（四）膜抗原熒光抗體染色法
本法應用直接法或間接法的原理和步驟，可對活細胞在試管內進行染色，常用于T和B細胞、細胞培養物、瘤細胞抗原和受體等的檢查和研究，陽性熒光主要在細胞膜上。FACS即采用此法原理。
（五）雙重染色法
在同一標本上有兩個抗原需要同時顯示（如A抗原和B抗原），A抗原的抗體用FITC標記，B抗原的抗體用羅達明標記，可采用以下染色方法：
1．一步法雙染色 先將兩種標記抗體按適當比例混合（A+B），按直接法進行染色。
2．二步法雙染色 先用RB200標記的B抗體染色，不必洗去，再用FITC標記的A抗體染色，按間接法進行。
結果：A抗原陽性熒光呈現綠色，B抗原陽性呈現桔紅色熒光。
（六）熒光抗體再染色法
若切片或其他標本經某種熒光抗體染色后，未獲得陽性結果，而又疑有另外的病原體存在時，可用相應的熒光抗體再染色。
有時存檔蠟塊不能再用以切片，也可用存檔的HE染色標本，褪去蓋片和顏色，再作免疫熒光或其它免疫細胞化學的染色。
三、熒光抗原染色法
某些抗原可以用熒光素標記，制成熒光抗原，標記熒光素的方法與制備熒光抗體方法相同。用熒光抗原可以直接檢查細胞或組織內的相應抗體，特異性較好，敏感性較差。染色方法同熒光抗體染色的直接法。由于多數抗原難以提純或量少不昂貴，一般很少采用此法。