1. 石蠟切片常規脫蠟至水，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3×3 min。
2. 0.1％ 胰蛋白酶 37℃ 消化 20 min，或抗原修復 20 min（98℃），自然冷卻至室溫。
3. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3×3 min。
4. 1％ EA（卵蛋白）15 min，不洗。
5. 適當稀釋的特異抗體室溫 4 h 或 4℃ 孵育 20 h，或 37℃ 孵育 1 h。
6. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3×5 min。
7. 0.02mol/L（pH 7.4）TBS（內含 0.1％ BSA）洗 10 min。
8. 1％ EA 15 min，不洗，滴加 PAG 10 nm 1:40 稀釋，室溫 1 h，或 37℃ 孵育 30 min。
9. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 10 min。
10. 兔抗 SPA IgG 1:400 稀釋，37℃ 30 min。
11. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 10 min。
12. 滴加 PAG 10nm 1:60 稀釋，室溫 1 h，或 37℃ 30 min。
13. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 10 min。
14. 1％ 戊二醛洗 10 min。
15. 雙蒸水洗 5 min。
16. 1％ 明膠洗 5 min。
17. 銀避光顯影 8～15 mm。
18. 雙蒸水洗 15 min。
19. 固定：用顯影定影液（1:4 或 1:10）固定 5 min，也可以用 15％ 硫酸鈉-20％ 硫代硫酸鈉混合液固定 1～3 min，或用 1％ 戊二醛固定 5 min，50℃ 溫水洗 3～6 min。
20. 襯染：核固紅襯染 3 min 或甲基綠襯染 3 min。
21. 常規脫水，樹膠封片。
22. 鏡檢：陽性物質呈黑色或黑褐色，顆粒分布于抗原-抗體反應部位；背景較干凈，呈紅色。 展開 | 