1. 石蠟切片常規脫蠟至水。
2. 0.1％ 胰蛋白酶 37℃ 消化 20 min，或抗原修復 20 min（98℃），自然冷卻至室溫。
3. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 3 min。
4. 1％EA（卵蛋白）15 min，不洗。
5. 適當稀釋的特異抗體室溫 4 h 或 4℃ 孵育 20 h，或 37℃ 孵育 1 h。
6. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 5 min。
7. 0.02 mol/L（pH 7.4）TBS（內含 0.1％ BSA）洗 10 min。
8. 1％ EA 15 min，不洗，1:10～1:20 稀釋的 PAG 10 nm 室溫孵育 1 h，或 37℃ 孵育 30 min。
9. 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 10 min。
10. 1％ 戊二醛洗 10 min。
11. 雙蒸水洗 5 min。
12. 1％ 明膠洗 5 min。
13. 銀避光顯影（見銀顯影劑配方）8～15 min。
14. 雙蒸水洗 15 min。
15. 固定：用顯影定影液（1:4 或 1:10）固定 5 min，也可以用 15％ 硫酸鈉-20％ 硫代硫酸鈉混合液固定 1～3 min，或用 1％ 戊二醛固定 5 min，溫水洗 3～6 min。
16. 漂白：用 2％ 鐵氰化鉀和 1％ 溴化鉀洗 10 min，雙重蒸餾水洗 5 min。
17. 彩色顯影：用萘酚或菲尼酮或堿性品紅顯色 2～4 min，雙重蒸餾水洗 5～10 min。
18. 固定：2％ 硫代硫酸鈉和亞硫酸鈉洗 5 min。
19. 流水沖洗。
20. 緩沖甘油封片，觀察。 展開 | 