免疫金組織化學染色實驗—

發布時間：2019-04-07 15:47 原文鏈接：免疫金組織化學染色實驗——IGS間接法

實驗方法原理	免疫金染色（immunogold staining，IGS）法是由 Geoghegan 等（1978）首次應用金標探針檢測 B 淋巴細胞表面抗原，將膠體金顆粒（大于 20 nm）標記在第二抗體或 SPA 分子上，制備成金標二抗。其原理是當特異性抗體與抗原結合后，用金標二抗或金標 SPA 與特異性抗體結合，形成抗原-抗體-金標抗體復合物，此時在光鏡（10 × 100 倍）下可見紅色顆粒物，即為抗原-抗體結合物。該方法特點簡便、快速（因不需銀顯影），要求金標抗體濃度高，而且金顆粒直徑大于 20 nm。
實驗步驟	1. 4 μm 石蠟切片常規脫蠟至水，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 2 × 3 min。 2. 1％卵蛋白 [EA，用 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 稀釋] 溫育 15 min，不洗。 3. 加入適當稀釋特異性抗體，37℃ 溫育 1 h，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 2 × 3 min。 4. 0.02 mol/L（pH 7.4）TBS（內含 0～1％ BSA）洗 10 min。 5. 1％卵蛋白溫育 15 min，不洗。 6. 適當稀釋的金標記 SPA 30 nm（PAG 30 nm）室溫孵育 1～2 h，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 3 min。 7. 雙重蒸餾水洗 5 min，1％戊二醛洗 10 min，雙重蒸餾水洗 5 min。 8. 用 0.01％伊文斯藍襯染 3 min，50％緩沖甘油封片。 9. 結果觀察：陽性呈現紅色細顆粒狀。展開

實驗方法原理

免疫金染色（immunogold staining，IGS）法是由 Geoghegan 等（1978）首次應用金標探針檢測 B 淋巴細胞表面抗原，將膠體金顆粒（大于 20 nm）標記在第二抗體或 SPA 分子上，制備成金標二抗。其原理是當特異性抗體與抗原結合后，用金標二抗或金標 SPA 與特異性抗體結合，形成抗原-抗體-金標抗體復合物，此時在光鏡（10 × 100 倍）下可見紅色顆粒物，即為抗原-抗體結合物。該方法特點簡便、快速（因不需銀顯影），要求金標抗體濃度高，而且金顆粒直徑大于 20 nm。

實驗步驟

1. 4 μm 石蠟切片常規脫蠟至水，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 2 × 3 min。

2. 1％卵蛋白 [EA，用 0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 稀釋] 溫育 15 min，不洗。

3. 加入適當稀釋特異性抗體，37℃ 溫育 1 h，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 2 × 3 min。

4. 0.02 mol/L（pH 7.4）TBS（內含 0～1％ BSA）洗 10 min。

5. 1％卵蛋白溫育 15 min，不洗。

6. 適當稀釋的金標記 SPA 30 nm（PAG 30 nm）室溫孵育 1～2 h，0.05 mol/L（pH 7.4）TBS 洗 3 × 3 min。

7. 雙重蒸餾水洗 5 min，1％戊二醛洗 10 min，雙重蒸餾水洗 5 min。

8. 用 0.01％伊文斯藍襯染 3 min，50％緩沖甘油封片。

9. 結果觀察：陽性呈現紅色細顆粒狀。

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