兔食管上皮細胞培養步驟

原代細胞實驗材料：
      1. 大兔的正常食管組織
      2. 6孔培養板：用多聚賴氨酸4℃包被過夜
      3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.4
      4. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷
 
      實驗方法：
      1. 處死大兔，取正常食管組織放入含雙抗的PBS（pH=7.2）中反復清洗3次，以洗去組織表面的血絲及粘液；
      2. 小心的用眼科剪鑷將食管黏膜與黏膜下組織分離；
      3. 分離出的粘膜組織用含雙抗的PBS（pH=7.2）反復沖洗若干次；
      4. 將清洗后食管黏膜組織剪成1mm3 左右大小的組織塊；
      5. 再次用含雙抗的PBS（pH=7.2）反復清洗，直至清洗液清亮為止；
      6. 將黏膜組織塊按1塊/cm2 的密度接種于6孔培養板中，上皮面朝下；
      7. 將貼滿組織塊的培養板室溫放置5~10分鐘，待組織塊貼壁后，轉入37℃、5%CO2 的培養箱中靜置培養。
      8. 靜置2h左右，待組織塊基本不會浮起后，加入0.5-1ml培養液，置于37℃、5%CO2 的培養箱中繼續培養。3-4天后有上皮原代細胞從組織邊緣爬出，7天左右鋪滿板面。
人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine，u-T3 ELISA Kit                    
人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone，LHRH ELISA Kit                     
人8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human 8-iso prostaglandin，8-iso-PG ELISA Kit                    
人腎素(Renin)ELISA試劑盒     進口/分裝    Human Renin ELISA Kit                    
人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Epinephrine/Adrenaline，EPI ELISA Kit                    
人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒    進口/分裝    Human Estradiol receptor，ER ELISA Kit