全國生物醫藥色譜會大會報告（二）

　　2012年4月21-22日，全國生物醫藥色譜及相關技術學術交流會在美麗的山城重慶成功召開。大會設立主會場和3個分會場，其中大會報告16個、分會報告90個、征集墻報論文100篇。

　　大會報告內容廣泛，涉及色譜及色譜分離材料最新技術進展、煙草特有亞硝胺分析、生物標志物及毒劑溯源檢測、毛細管電泳方法研究、新藥領域的最新色譜技術、表面等離子體共振成像、環境分析檢測熒光免疫芯片、代謝組學研究、蛋白質組學研究、新型化學污染物分析等。以下是精彩的大會報告報道。

中國科學院化學研究所 陳義教授

　　來自中國科學院化學研究所的陳義教授為大家介紹了表面等離子體共振成像方法與應用。陳教授在報告中講到可原位實時或動態分析分子間的相互作用以及化學反應過程，測定相關的熱力學與動力學參數，在DNA、蛋白質、糖及糖綴合物等一系列重要生物分子識別、篩選等分析中具有重要或潛在的應用，可開發成藥物篩選的新工具。它還能與分離方法如色譜、電泳、電化學、質譜等方法聯用，構建更加強大的分析新工具或新平臺，具有良好的研究發展前景。陳教授在報告中主要介紹了SPRi的發展概況，重點匯報所在實驗室在SPRi上的研究進展，包括相關儀器裝置的研發、方法發展、應用研究等。

　　陳教授重點指出在組學等面向高度復雜樣品的研究領域，發展一種全新概念的方法即SPRi非分離分析技術并因此展開了一些探索，雖才開始，但已經初露端倪。

中國科學院大連化學物理研究所 梁鑫淼教授

　　來自中國科學院大連化學物理研究所的梁鑫淼教授向大家匯報了色譜分離材料進展。解決復雜體系的各種分離難題，僅依靠商品化的色譜柱是完全不夠的。近幾年，梁教授實驗室發展了多種新型分離材料，包括：液相色譜基質分離材料、基質表面鍵合方法學、新型親水色譜材料、新型高選擇性富集材料，取得了系列研究成果。如在基質表面鍵合方法方面，將“點擊化學”引入到硅膠基質分離材料的制備中，發展了一種制備鍵合固定相的新方法。最近，又發展了無銅催化的“巰基-烯烴”點擊化學用于分離材料的功能配基鍵合。采用該方法制備得到了兩性離子HILIC固定相，該固定相具有很高的親水性和色譜分離效率，在極性化合物(包括寡糖、多肽及堿性化合物)的分離中具有很好的選擇性。針對反相色譜固定下相，發展了一種基于硅膠“表面水平聚合”方法的鍵合技術—極性共聚技術，用于制備極性反相色譜固定相。該鍵合技術可根據需要，通過對不同種類的非極性基團和極性基團進行組合或者調整極性基團和非極性基團的比例，制備各種類型的固定相，滿足不同樣品的分離需求。

中國科學院生態環境中心 郭良宏研究員

　　來自中國科學院生態環境中心的郭良宏研究員演講的報告題為《用于多種環境有機污染物并行檢測的熒光免疫芯片研究》。免疫分析方法由于具有快速、簡便、靈敏度高、選擇性好等優勢，已廣泛應用于生命科學、藥物分析、臨床診斷及環境監測領域。在免疫分析過程中，如何將更多的信號分子標記于同一個抗原或抗體上，使檢測信號得到增強，靈敏度得到提高，同時不影響抗原或抗體的識別性能，是一個難點問題之一。

　　郭老師課題組在研究中以長鏈寡核苷酸作為熒光信號分子的載體，利用一個寡核苷酸分子具有多個熒光染料結合位點的特性，搭建了一種由核酸/熒光染料結合體構成的鏈狀標記物，用于抗體的多重熒光標記。與常規的熒光染料單分子標記比較，本方法提供的標記物中的熒光染料不只一個，而是十幾個甚至幾十個，因此可以大幅度提高熒光信號的強度，明顯改善檢測靈敏度。

　　我們采用220個堿基對的核酸作為熒光染料的載體，對雌二醇抗體進行高標記，并應用于雌二醇E2的快速免我們采用220個堿基對的核酸作為熒光染料的載體，對雌二醇抗體進行高標記，并應用于雌二醇E2的快速免疫檢測，在96孔微孔板上得到典型的競爭曲線。與常規熒光標記物比較，檢測下限從400 pg/mL降低到2 pg/mL(2 ppt)。而且抗體的特異性得到保持，與E2結構相似的其他化合物如estrone, estriol, ethinyl estradiol，diethylstilbestrol等對雌二醇的檢測沒有干擾。用競爭法對標樣中的BDE-47進行測定，獲得的IC50約50ng/mL,, 檢測下限726.2 pg/mL。采用同樣的方法，我們對苯并[a]芘BaP進行了熒光免疫檢測。獲得的IC50約130 ng/mL, 檢測下限3.4 ng/mL。

　　在完成了對E2、BaP和BDE-47這三種常見環境污染物的單獨檢測后，又利用免疫生物芯片，研究了這三種污染物的同時、并行檢測。通過一系列實驗證明，所建立的核酸多標記熒光免疫方法，能應用于免疫生物芯片，實現對多種環境化合物的快速、高靈敏度、并行檢測。

安捷倫科技（中國）限公司 安蓉工程師

　　來自安捷倫科技（中國）限公司的應用工程師安蓉，為大家帶來《安捷倫革新液相色譜技術》報告。安老師重點介紹了安捷倫的多款產品包括最新的四元泵1290infinity液相、1260Infinity Bio-Inert LC生物惰性液相色譜、Infinity SFC超臨界流體色譜方案。

賽默飛世爾科技（中國）有限公司 梁立娜經理

　　來自賽默飛世爾科技（中國）有限公司的梁立娜經理為大家帶來的報告題為《賽默飛TMO生物醫藥整體解決方案》。賽默飛世爾科技為藥物研究實驗室、藥物開發實驗室、工藝過程開發與生產環節提供制藥完全解決方案。梁經理重點介紹了賽默飛世爾科技的ICS-5000離子色譜及Ultimate 3000UHPLC同質譜聯分析糖和糖苷的案例。

中國醫學科學院藥物研究所 再帕爾教授

　　來自中國醫學科學院藥物研究所的再帕爾教授演講的報告題為《基于LC-MS/MS技術的代謝組學分析方法研究》。代謝組學是近十年來發展起來的一門新興學科，并已成為系統生物學的重要組成部分。它主要針對生物體系受外部刺激或擾動后所產生的內源性小分子代謝物的整體及其動態變化規律進行研究；并將確定該變化規律與生物過程的有機聯系。近五年來，再帕爾教授實驗室經系統研究與探索，建立了基于LC-MS/MS技術的代謝組學分析方法，并將其應用于與惡性腫瘤的疾病診斷及療效評價，以及與藥物的藥效及毒性作用等密切相關的生物標志物的尋找與發現。

　　在分析技術方面，為了獲得更加完整的代謝物信息，首先我們運用HILIC-MS與RPLC-MS相結合的手段，建立了對同一尿液經固相萃取（SPE）后的水洗脫部位和甲醇洗脫部位進行系統分離分析的方法。在此基礎上，提出“減少分離、分類分析”的研究思路，探索并建立了以電噴霧電離（ESI）、大氣壓化學電離（APCI）、大氣壓光致電離（APPI）三種電離方式相結合的“組合式”RRLC-MS/MS新型分析方法。運用本方法結合多變量數據處理方法開展了肺癌患者尿液的代謝組學研究， 此外，還開展了肺癌、食管癌患者治療前與治療后尿液、血漿樣本的代謝組學研究。結合患者臨床的療效評價，系統考察了可能生物標志物在健康狀態、肺癌治療前和治療后三個階段的變化趨勢，尋找到了一些與療效相關的生物標志物，有望為肺癌的臨床療效評價和預后判斷提供重要依據。

　　再帕爾教授最后總結說，雖然代謝組學技術已發展了十余年，但在方法學上還存在諸多不足之處。其中，針對不同批次LC-MS譜數據的整合與分析、數據挖掘及信息與生物學的相關性、去除高豐度代謝物的干擾和體內微量代謝物的結構鑒定等難題，需要分析化學、化學計量學、統計學、生物學及生物化學等不同學科的協作與共同努力來取得突破。

復旦大學 楊芃原教授

　　來自復旦大學的楊芃原教授為大家作的告題為《糖修飾蛋白組的標記和分離》。我們將串聯多酶切技術與糖基化富集技術聯合，建立了改善傳統糖基化實驗路線不足的新策略：策略之一，可改善高特異性富集下僅依賴去糖基化肽段實現蛋白、位點的鑒定，而使糖蛋白序列覆蓋度較低的問題，以及增加糖基化位點鑒定的可靠度；策略之二，有別于傳統完整糖肽分析中糖蛋白/位點鑒定與糖肽解析分流程進行的路線，可僅使用一個流程、一步到位的實現蛋白鑒定和糖肽解析。

　　目前，基于質譜檢測的化學標記是進行糖鏈定量的有效方法，如同位素碘甲烷的全甲基化技術，同位素苯衍生物的還原端標記技術，以及代謝標記技術都是有力的定量糖組學技術。但是這些技術都需要在實驗過程中進行額外的化學反應，這不僅需要引入額外的試劑，增加反應步驟，還會產生副反應，無論對標記效率還是樣品純化都有著不利地影響。蛋白定量中的酶促18O標記方法可以很好地解決上述問題，但是這種方法一直無法應用到糖鏈相對定量中。研究中我們發現，一類切糖酶-糖苷內切酶(Endoglycosidase)，可以在切糖鏈的同時，將18O水中的18O引入糖鏈的還原末端，實現糖鏈的18O標記。而標記上的18O非常穩定，即使進一步對糖鏈進行全甲基化（起到穩定糖鏈、增強質譜信號的作用）也不受影響。基于該反應，我們發展出了全新的糖鏈定量方法-糖鏈還原末端18O標記(GREOL)技術，并利用兩種標準糖蛋白(Invertase 和Ovalbumin)的六種糖鏈考察了該方法的線性和重復性。我們將標記后的糖鏈和未標記的糖鏈按10:1，5:1，2:1，1:1，1:2，1:5，1:10的摩爾比混合并用質譜進行檢測。結果顯示，該技術的線性非常好，所有糖鏈的R2均大于0.99，而相對標準偏差(CV)均小于20%，說明方法同樣顯示出很高的重復性。

中國科學院生態環境研究中心 江桂斌院士

　　來自中國科學院生態環境研究中心的江桂斌院士帶來的報告題為《色譜/質譜技術在新型化學污染物分析中的應用》

　　近十年來，隨著經濟的快速發展，各種化學品在工農業生產與日常生活中得到了廣泛應用。新型化學污染物（Emerging Chemicals）指尚未被廣泛地檢測出來的人工合成或自然存在的化學物質。 這些物質通常具有潛在的進入環境并導致健康影響的可能性。2009 年5月8日，又有 9 類新型化學污染物 進入聯合國斯德哥爾摩公約限制名單。然而，我國對于新型污染物的研究大多限于對國際關注熱點的跟蹤， 缺乏針對我國污染特點的特定污染物的前瞻性的研究。這就使得我國在新 POPs 的污染控制、國際談判等方 面繼續處于被動局面。 由于新型污染物通常濃度較低、組分復雜，而且干擾物質較多，因此，對分析技術有更高的要求，發展高靈敏度和高選擇性的分離分析方法是解決問題的主要出路。報告主要介紹了近年來，江院士課題組依托先進的色譜和質譜技術，在新型污染物的篩選及識別技術方面開展了一些工作，通過不同的技術路線篩選到一些新的污染物并開展了有關毒理學的前期研究。