實驗概要
生理學和遺傳學研究表明,共生菌能為其寄主提供食物中缺乏的氨基酸。本研究的目的是弄清黑豆蚜在脫去共生菌后的生長發育及其體內蛋白質和游離氨基酸水平的變化。
實驗材料
黑豆蚜用盆栽蠶豆(Vicia faba L.)苗飼養,溫度23-25℃,光周期16:8。
實驗步驟
1. 脫共生蚜蟲的培養
將3周大的蠶豆苗根部沖洗干凈后浸在200ug/ml的利福平溶液中,24小時后,接上成蚜使之產子,10小時后移去成蚜有,再過48小時后移入正常植株飼養。經過這種處理所獲得的蚜蟲即是脫共生蚜蟲。未經抗生素處理的正常蚜蟲稱為共生蚜蟲。
2. 脫共生蚜蟲發育和生殖觀察
在每株豆苗上接5頭利福平處理過的黑豆蚜,用正常蚜蟲作對照。觀察并記錄蚜蟲的發育情況和生殖數量。在蚜蟲發育為成蚜的當天在顯微鏡下測量蚜蟲的體長和體寬。
3. 總蛋白和游離氨基酸含量測定
1) 蚜蟲體內的總蛋白含量測定用Bradford (1976)的方法,用牛血清蛋白作對照。按照Wilkinson(1996)的方法提取總蛋白。取10-30頭7日齡的蚜蟲,稱重后加0.4ml冰冷的50mM Tris-HCl pH7.5進行勻漿,13000rpm離心l0min,上清液用于總蛋白含量的測定。
2) 游離氨基酸的提取方法是:將蚜蟲稱重后,在80%的冷甲醇中勻漿,13000rpm離心l0min,上清液用于測試。本試驗用Hitachi 835-50型氨基酸自動分析進行測試,總共可分析出17種氨基酸。
4. 統計分析
所測定的數據用學生氏t-測驗進行分析,用Microsoft Excel 2002軟件(Microsoft)進行計算。