不能用心臟或肺部疾病解釋的發紺病人，且經吸氧療而無效者，應考慮有高鐵血紅蛋白血癥的可能性。患者的靜脈血呈巧克力褐色，經接觸空氣并在試管中搖動后顏色不變，診斷大致可以肯定。獲得性MetHb經加入幾滴10%氰化鉀后即可產生鮮紅色的氰化高鐵血紅蛋白，可以此與硫血紅蛋白及其它MetHb相區別。用分光鏡檢查，在502～632nm之間，獲得性MetHb有特殊吸光譜，并在630nm處有一深色特殊吸光帶，經加入幾滴5%氰化鉀后即見消失。淀粉板或淀粉凝膠電泳可用以鑒定HbM。
