隔夜禁食后，口服一定量的乳糖水溶液。乳糖不耐癥可由下列幾種手段之一診斷： 出現腹脹或腹部不適 呼氣中監測到腸道細菌乳糖代謝產生的氫氣 血糖上升值遠小于分別攝入同量的葡萄糖和半乳糖（乳糖酶解的自然產物）結果 最嚴格的診斷方法是進行腸道活檢來確定乳糖酶的活躍程度。 觀察各種乳制品攝入與腹脹、腹瀉癥狀的相關關系，也可作為非醫學的粗略診斷方法。例如第一天飲兩杯牛奶，第二天吃相當量的硬干酪，分別觀察有無癥狀。只是第一天有癥狀的話大概是乳糖不耐癥，兩天都有癥狀的話，則有可能是對乳制品過敏。
