取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法測定（2010年版藥典二部附錄Ⅵ H），pH值應為4.0～6.0。
取本品約0.125g，精密稱定，置100ml量瓶中，加稀釋液（取乙二胺四醋酸二鈉1.0g，加水溶解并稀釋制成1000ml，搖勻）溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取在105℃干燥至恒重的青霉胺二硫化物對照品適量，精密稱定，加稀釋液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含12.5μg的溶液，作為對照品溶液；取青霉胺對照品與青霉胺二硫化物對照品適量，加稀釋液溶解并稀釋制成每1ml中含青霉胺1mg和青霉胺二硫化物0.1mg的溶液作為系統適用性試驗溶液。照高效液相色譜法（2010年版藥典二部附錄Ⅴ D）測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鈉己烷磺酸鈉溶液[取磷酸二氫鈉6.9g和己烷磺酸鈉0.2g，加水900ml使溶解，用磷酸溶液（1→10）調節pH值至3.0±0.1，再用水稀釋至1000ml，混勻]為流動相；檢測波長為210nm。取系統適用性試驗溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，青霉胺峰和青霉胺二硫化物峰的分離度應大于3.0。取對照品溶液20μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的25%，再精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，含青霉胺二硫化物不得過1.0%。
照抗生素微生物檢定法（2010年版藥典二部附錄Ⅺ A）測定。
胨6.0g，胰酶消化酪蛋白4.0g，酵母浸出粉3.0g，牛肉浸出粉1.5g，葡萄糖1.0g，瓊脂15.0g，水1000ml，調節pH使滅菌后為6.5～6.7，在115℃滅菌30分鐘。
藤黃微球菌照藤黃微球菌[CMCC（B）28001]項下制備菌液。
精密稱取青霉素對照品適量，加滅菌磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.02單位的溶液。
取本品1g，精密稱定，置分液漏斗中，加水9ml使溶解，加乙醚10ml與磷酸鹽緩沖液（pH 2.5）1ml，振搖提取1分鐘，分取水層至另一分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次10ml，合并醚層，加水9ml及磷酸鹽緩沖液（pH 2.5）1ml，振搖30秒，棄去水層（以上操作應在6～7分鐘內完成）。醚層用10ml滅菌磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）提取3分鐘，分取水層5ml為供試品溶液（1），剩余水層加0.1ml青霉素酶（每1ml青霉素酶應大于300萬單位）在36～37℃放置1小時作為供試品溶液（2）。
取雙碟不少于4個，每雙碟中底層加培養基10ml，菌層加培養基5ml，每雙碟安置不銹鋼小管6個，分別在對角的二管中滴加對照品溶液、供試品溶液（1）與供試品溶液（2），在29～30℃培養24小時，測量各抑菌圈直徑，供試品溶液（1）所致的抑菌圈平均直徑不得大于對照品溶液所致抑菌圈的平均直徑，供試品溶液（2）不得產生抑菌圈（0.2單位/g）。
取本品，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥至恒重，減失重量不得過0.5%（2010年版藥典二部附錄Ⅷ L）。