(1)鼓膜：急性者松弛部或全鼓膜充血內陷或外凸，表現為光錐縮短、變形或消失，錘骨柄向后、上移位，捶骨短突明顯外突。鼓室積液時鼓膜失去正常光澤，呈淡黃、橙紅油亮或琥珀色，光錐變形或移位。慢性者可呈灰蘭或乳白色，鼓膜緊張部有擴張的微血管，捶骨柄呈浮雕狀。若液體為漿液性，且未充滿鼓室，可透過鼓膜見到液平面。此液面狀如弧形發絲，稱為發狀線，凹面向上，頭位變動時，其與地面平行的關系不變。透過鼓膜有時尚可見到氣泡，咽鼓管吹張后氣泡可增多。
(2)聽力檢查：純音聽閥測試結果顯示傳導性聾。聽力損失一般以低頻為主，但由于中耳傳聲結構及兩窗的阻抗變化，高頻氣導及骨導聽力亦能客觀下降，積液排出后聽力即改善。聲導抗圖對診斷有重要價值，平坦型(B型)為分泌性中耳炎的典型曲線；負力型(C型)示咽鼓管功能不良，部分有鼓室積液。當兒童不配合時可改腦干誘發電位檢查，多能準確反映兒童的聽力損害情況，查找病因，對癥處理，早日恢復兒童的聽力。
(3)CT掃描可見中耳系統氣腔有不同程度密度增高。
(4)鼓氣耳鏡檢查鼓膜活動受限。