（1）髂骨穿刺抽取少許骨髓，制成涂片，染色后鏡檢。此法的利什曼原蟲檢出率約在85%左右。合并HIV感染的利什曼病患者，檢出率可達98%。
（2）脾臟穿刺吸出脾髓，針頭拔出后，即將針頭內的脾髓注射于玻片上，制成涂片，染色鏡檢。脾穿刺法的原蟲檢出率很高，可達95%左右。
（3）淋巴結穿刺淋巴液制成涂片，染色鏡檢。該法對初診病人而言，原蟲的檢出率一般為50%左右，但合并HIV感染的利什曼病患者，檢出率可達100%。
（4）皮膚刮片檢查制成涂片后染色鏡檢。如是PKDL，一般都能查見利什曼原蟲。
（5）原蟲培養在嚴格的無菌操作下，把可疑病人的骨，脾、淋巴結或皮膚損害內所取得的各種組織液置三恩培養基內，放入22～240C溫箱內培養。15天后用白金耳取少量培養液于玻片上，在光學顯微鏡（高倍）下檢查，如查見利什曼原蟲前鞭毛體，即可確定診斷。