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  • 發布時間:2022-10-25 18:56 原文鏈接: 關于化學轉染的方法介紹

      1.DEAE-葡聚糖法

      DEAE-葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合后接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地應用于瞬時表達的研究,但用于穩定轉染卻不是十分可靠。

      2.磷酸鈣法

      磷酸鈣法是磷酸鈣共沉淀轉染法,因為試劑易取得,價格便宜而被廣泛用于瞬時轉染和穩定轉染的研究,先將DNA和氯化鈣混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉淀,最后把含有沉淀的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA免受降解.

      3.人工脂質體法。

      人工脂質體法采用陽離子脂質體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質。此外,脂質體體外轉染同時適用于瞬時表達和穩定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA轉入動物和人的體內用于基因治療。LipoFiterTM脂質體轉染試劑(LipoFiterLiposomalTransfectionReagent)是一種適合于把質粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白復合物轉染到培養的真核細胞中的高效陽離子脂質體轉染試劑。它可以和帶負電荷的核酸結合后形成復合物,當復合物接近細胞膜時被內吞成為內體進入細胞質,隨后DNA復合物被釋放進入細胞核內,至于DNA是如何穿過核膜的,其機理目前還不十分清楚。

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