融合后的原生質體具有生物活性，但不具有細胞壁，無法表現優良的生產性狀，不能在普通培養基上生長，必須設法讓它長出細胞壁，所以將重新形成細胞壁的過程稱為再生。再生培養基必須具有與原生質體內相同的滲透壓，常用含有Ca2+、Mg2+或增加滲透壓穩定劑的完全培養基。把融合的原生質體涂布于添加滲透穩定劑的高滲瓊脂培養基上，或者把原生質體懸液混合在培養基中，進行瓊脂夾層培養，使其再生細胞壁。增加高滲培養基的滲透壓或添加蔗糖可增加再生率，恢復正常細胞形態后，才能在普通培養基上正常生長。再生率因菌種本身的特性，原生質體制備條件，再生培養基成分及再生條件等不同而由百分之零點幾提高至百分之幾十。