對上述具有一種或幾種臨床癥狀，且有明確家族史的患者，通過測定上述有關內分泌腺體分泌的激素水平及功能試驗，并進行相應的定位檢查，一般可明確診斷。如測血清鈣、完整甲狀旁腺激素、促胃液素和催乳素等；當需要時，作附加實驗室和診斷試驗，垂體CT或MARI亦應進行。胰腺胰島素分泌β細胞瘤通過證明空腹低血糖伴有高胰島素血癥而確立診斷。促胃液素分泌非β細胞腫瘤可有高基礎促胃液素水平，對鈣滴注示有過度反應和灌注胰泌素后有促胃液素反常升高而確立診斷。高基礎胰多肽或促胃液素或對標準餐這一激素過度反應，可能是MEN-I綜合征累及胰腺的早期癥狀。生長激素增加，不能被葡萄糖和高水平生長介素-C(也叫胰島素樣生長因子-1或IGF-Ⅰ)所抑制而確立肢端肥大癥診斷。
由于MEN1型的臨床病程在不同的患者是可以完全不相同的，并且多個腺體的病變可以同時或先后發生，也有的患者在出現第一個腺體的病變若干年后才發生其他腺體的病變。因此，當診斷此病時應先是詳細詢問并了解其個人與家族病史，再進行相關檢查以確診本病，對患病或未患病的家族成員均應進行嚴密隨診，定期進行相關檢查。有條件的實驗室可進行menin基因突變檢測。
MEN1型需要與非MEN的同類病變相鑒別，兩者的臨床表現及定性、定位檢查相似，但從其多發性病變及家族史不難進行鑒別。