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  • 發布時間:2020-09-14 20:46 原文鏈接: 關于多聚賴氨酸的配制、保存、使用總結與問題1

    因為自己做PC12細胞培養,想在接種前將培育皿用多聚賴氨酸包被,到論壇里搜索了下,關于多聚賴氨酸的帖子不少,看了一些帖子,將大部分收集在此。個人覺得關于多聚賴氨酸的配置、保存、使用各方面問題,這些帖子里面都解釋了。

    注:我只是摘了一個帖子里某段或某句話。一般一段話來自某一位朋友。

    一、常用的多聚賴氨酸包被可以用三蒸水,或者PBS,濃度一般為用0.1 mg/ml進行包被。
    二、其他常用包被方法比較(以各種免疫分析為例):
    三、我配成1mg/ml的儲存液,用Mini-Q(超純水)配制,放在-20℃儲存,使用時稀釋10倍(也用超純水),即終濃度100ug/ml,過濾后使用。工作液過濾使用,如一次用不完,放在4℃儲存。

    多聚賴氨酸在水溶液中易分解,所以一次不要配太多工作液。
    四、我現在要配多聚賴氨酸,書上寫的用 PBS配,但沒寫PH,濃度,向各位請教。

    答:PH應該在7.0~7.4,PBS:取氯化鈉7.650 g,無水磷酸 氫二鈉0.724 g,磷酸二氫鉀0.210g 溶于蒸餾水1000 mL 中,以1N 氫氧化鈉 溶液調pH 值為7.0~7.4,經121℃滅菌15 分鐘

    五、我準備用多聚賴氨酸涂片培養細胞,不知道多聚賴氨酸涂過的玻片如何滅菌?能否干烤滅菌?

    答:Sigma的產品說明書上寫的很明白的。

    另外,有本書上是這么寫的,供參考:

    Poly-lysine-coated tissue culture surfaces

    To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.

    To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.


    Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.

    你可以配置好PLL后單獨將其過濾除菌,分裝,待用。玻片也是事先泡洗潔精,泡酸,雙蒸水洗,烘干后高壓滅菌,待用。培養的前一天包被培養板時先把玻片放入培養孔然后把PLL加到玻片上,靜置15分鐘,洗出多余的PLL,然后用高壓過的雙蒸水洗板,培養板放入37度烘箱里過夜就可以用了。

    六、多聚賴氨酸消毒該怎么辦??

    答:紫外照射消毒我沒試過,但用0.22um的濾器消毒是沒問題的(小的一次性濾器可以過濾200ml)。在液體消毒時,如果所含成份經過高溫,鈷 60照射發生變性者,建議用濾器(0.22),多聚賴氨酸為氨基酸類,建議用濾器,如果要求程度高,可以兩個濾器過濾兩次。

    七、資料:多聚賴氨酸溶液(Poly-L-Lysine Solution)Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃Thimerosal, 0.01%, added as preservative 多聚賴氨酸溶液是廣泛應用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產生較強的黏合力。


    適用組織學,免疫組織化學,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等使用的玻片的防脫片處理,以防實驗操作過程中組織掉片。也可用于細胞培養,增加細胞貼壁能力。


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