純化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度離心法,能得到比較純的病毒。其過程如下:
1、將收集的組織或臟器或其他,用玻璃勻漿器充分研磨后制成懸液,經反復凍融3 次后,置 -20 ℃冰箱中,備用。
2、先以5000g離心15分鐘后,獲取上清夜,然后再20000g高速離心30分鐘后取上清夜。
3、接著10萬g超速離心2h,將沉淀用少量STE溶解。
4、先在超速離心管中加入5-8mL的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液,然后在離心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h,發現在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶,用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來,分別收集到不同的瓶內。
5、去蔗糖;用STE緩沖液適量稀釋純化的病毒,然后11萬g離心3h,用少量STE(根據沉淀的量決定加入多少)緩沖液把沉淀懸起,即最后獲得了純化的病毒。-20度凍純備用,用時可用分光光度計測定其病毒含量。