1.血象
血鉀降低，代謝性堿中毒、糖耐量降低、紅細胞、血紅蛋白增多，外周血T細胞、B細胞比例紊亂。
2. 血漿皮質醇水平和晝夜節律測定
正常人皮質醇呈脈沖式分泌，有明顯的晝夜節律。庫欣綜合征患者血漿皮質醇水平增高且晝夜節律消失。
3. 24小時尿游離皮質醇（UFC）測定
血皮質醇水平晝夜節律消失，測定24小時 UFC可避免血皮質醇的瞬時變化，也可避免受血中皮質類固醇結合球蛋白濃度的影響，對庫欣綜合征的診斷有較大的價值，診斷符合率約為98%，但一定要準確留取24小時尿量，并且避免服用影響尿皮質醇測定的藥物。24小時17-羥皮質激素、尿游離皮質醇增高。17-羥皮質激素正常值為男性13.0～38.4μmol/24h女性12.1～30.9μmol/24h。17-羥皮質類固醇測定的敏感性不如尿游離皮質醇。
4.促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）興奮試驗
給垂體性庫欣病患者靜脈注射合成的羊或人CRH后，血ACTH及皮質醇水平均顯著上升，其增高幅度較正常人明顯；而大多數異位ACTH綜合征患者卻無反應。所以，本試驗對這兩種ACTH依賴性的庫欣綜合征的鑒別診斷有重要價值。
5. 去氨加壓素（DDAVP）興奮試驗
去氨加壓素是V2和V3血管加壓素受體激動劑，可用于鑒別庫欣病和異位ACTH綜合征。該試驗是CRH興奮試驗的替代試驗，敏感性及特異性均低于CRH興奮試驗，用于無法獲得CRH試劑時。
6.血清促腎上腺皮質激素（ACTH）
腎上腺皮質腫瘤不論良性還是惡性，其血漿ACTH水平均低于正常值低限，而ACTH依賴性的庫欣病及異位ACTH綜合征患者，其血漿ACTH水平均有不同程度的升高。因此，血漿ACTH水平測定對鑒別ACTH依賴性和非依賴性有肯定的診斷意義，但對鑒別是來源于垂體性還是異位的ACTH分泌增多卻僅能作為參考。血清促腎上腺皮質激素水平升高顯著，通常為基線值3～7倍，腎上腺皮質腺瘤通常為基線值的2倍，腎上腺癌測定值無變化。
7.大劑量地塞米松抑制試驗
是目前用于確定過量ACTH來源的主要方法，服藥后UFC或血皮質醇水平被抑制50%以上為陽性。庫欣病患者在服藥第二日UFC（尿自由皮質醇）或17-羥皮質類固醇水平可以被抑制到對照日的50%以下，其診斷符合率約為80%；而腎上腺腺瘤或腺癌患者一般不能被抑制到50%以下；異位ACTH綜合征患者大多不被抑制，但某些支氣管類癌患者例外。過夜大劑量地塞米松抑制試驗的結果與經典法相似，且有快速、簡便的優點。血皮質醇不受地塞米松抑制。