1、成人常用量口服，一次0.25-0.5g（以新霉素計，下同），一日1-2g。肝性腦病的輔助治療，一次0.5-1.0g，每6小時一次，療程5—6天。結腸手術前準備，每小時0.5g，用藥4小時，繼以每4小時0.5g，共24小時。
2、小兒常用量按體重每日25-50mg/kg，分4次服用。隨訪檢查：聽力圖、腎功能測定、原有腎功能損害或第8對腦神經損害或長期治療的患者，需在用藥前以及用藥過程中進行檢查。用藥數日病情仍無進步者應進行檢查。
①新霉素可于空腹時或餐后服用；
②腎功能減退或第8對腦神經功能減退的患者需減量；
③如肝昏迷患者不能口服新霉素時，可用無菌新霉素粉配制成1%溶液作保留灌腸；
④硫酸新霉素毒性過大，已不作注射用。不宜大量體腔內留置給藥，因可吸收而致耳、腎毒性和抑制呼吸。