顯色反應能否滿足光度法的要求,除了主要與顯色劑的性質有關系外,控制好顯色反應的條件也是十分重要的。顯色條件包括顯色劑用量、酸度、顯色溫度、顯色時間及干擾的消除。
1、試劑用量
M(被測組分)+R(顯色劑)= MR(有色化合物)
為了使顯色反應盡可能進行完全,加入適當過量的顯色劑是必要的。但也不能過量太多,否則會引起副反應,對測定反而不利。在實際工作中,顯色劑的適宜用量是通過實驗求得的。固定被測組分的濃度和其它條件,分別加入不同量的顯色劑,測量吸光度,做吸光度 – 顯色劑用量曲線。
2、溶液酸度
溶液酸度對顯色反應的影響可從金屬離子、顯色劑及有色配合物三方面考慮。
大部分高價金屬離子都易水解,顯然,金屬離子的水解,對于顯色反應的進行是不利的,故溶液的酸度不能太低。
顯色劑多是有機弱酸,溶液的酸度影響著顯色劑的離解,并影響顯色反應的完全程度。此外,許多顯色劑本身就是酸堿指示劑,溶液的酸度對顯色劑本身的顏色會產生改變。
溶液的酸度對有色配合物的組成及穩定性也有影響。因此,某一顯色反應最適宜的酸度可通過實驗來確定。固定待測組分及顯色劑濃度,改變溶液pH,測定其吸光度,做吸光度-pH關系曲線,曲線平坦部分對應的pH為適宜的酸度范圍。
3、顯色時間
有些顯色反應較慢,需放置使其顯色完全。有些顯色配合物不夠穩定,放置后會產生部分分解,導致吸光度降低,因此適宜的顯色時間必須通過實驗來確定。從加入顯色劑計算時間,每隔幾分鐘測定一次吸光度,繪制A-t曲線,來確定適宜的時間。
4、干擾消除
主要有三種:利用掩蔽反應、分離干擾離子。