有關物質 取該品70mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；取對氨基苯甲酸對照品16.80mg，置50ml量瓶中，用流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對氨基苯甲酸儲備液；分別精密量取供試品溶液1ml、對氨基苯甲酸儲備液1ml，置同一100ml量瓶中，用流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照液相色譜法（附錄V D）測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；
流動相A為緩沖液（取磷酸二氫鉀14g和40%氫氧化四丁基銨溶液6.5g 溶解于約 700ml水中，用1mol/L氫氧化鉀溶液調節pH至7.0，用水稀釋至1000ml，混勻）-水-乙腈（52：28：20）；流速為每分鐘1.0ml。檢測波長為225nm。先以流動相A等度洗脫，待普魯卡因峰洗脫完畢后立即按下表進行線性梯度洗脫。分別取青霉素、鹽酸普魯卡因和青霉素鈉混合雜質對照品適量，用對氨基苯甲酸儲備液溶解并制成每1ml中分別含0.50mg、0.15mg和0.80mg的混合溶液，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，青霉素峰應在25分鐘內出峰，理論板數按普魯卡因峰和青霉素峰計算均應大于1500，除兩個主峰和對氨基苯甲酸外，應檢出一個較大的青霉素主雜質，對氨基苯甲酸與相鄰雜質峰、普魯卡因與青霉素主雜質峰、青霉素與相鄰雜質峰之間的分離度均應大于1.5。取對照溶液10μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使青霉素主峰的峰高為滿量程的15%～20%。再精密量取供試品溶液和對照溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，對氨基苯甲酸峰面積不得大于對照溶液對應峰的峰面積（0.024%），其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液青霉素主峰面積（1.0%）。